文档介绍：高效液相色谱柱柱效测定
实验者
学号
合作者
一、实验目的
了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理
2・学****高效液相色谱仪的使用
、掌握液相色谱柱柱效测定方法
二、基本原理
高效液相色谱法是以液体作高效液相色谱柱柱效测定
实验者
学号
合作者
一、实验目的
了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理
2・学****高效液相色谱仪的使用
、掌握液相色谱柱柱效测定方法
二、基本原理
高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：
u t
n = —r-
' 1/2
(t、2
=16 -R
l Y丿
式中：tR为组分的保留时间
R
Yi/2为色谱峰的半峰宽度
Y为色谱峰的峰底宽度
速率理论及范弟姆特方程式对于研究影响高效液相色谱柱效的各
种因素，同样具有指导意义:
H二A+B/u+Cu
然而由于组分在液体中的扩散系数很小，纵向扩散项(B/u)对色
谱峰扩展的影响实际上可以忽略，而传质阻力项(Cu)则成为影响柱效的主要因素，可见要提高液相色谱的柱效能，提高柱内填料装填的均匀性和减小粒度，以加快传质速率是非常重要的。目前所使用的固定相，通常为
5〜10耳的微粒，而装填技术的优劣亦将直接影响色谱柱的分离效能。
除上述影响柱效的一些因素外，对于液相色谱还应考虑到一些柱外展宽的因素，其中包括进样器的死体积和进样技术等所引致的柱前展宽，以及由柱后联接管、检测器流通池体积所引致的柱后展宽。
三、仪器和试剂
仪器1： KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）
仪器2： Agilent 1200高效液相色谱仪（紫外检测器）
50p 1微量进样器
试剂：，甲酯，乙酯，甲酯，丁酯，四种物质的混合液，纯水，去离子水，重蒸水。
四、实验条件
色谱柱1长15cm，，装填10 m的C-18烷基键
合固定相
流动相甲醇:水（83:17）；・min-1和1 mL・min-1
紫外光度检测器波长254nm，
进样量3p L
五、实验步骤
，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。
用10p L的微量注射器向色谱系统进10p L的空气。找出空气在色谱系统中的保留时间。
吸取3p l甲酯，乙酯，丙酯，丁酯的混合溶液进样，并用色谱工