文档介绍：单细胞全基因组测序一直是生物学家梦想得到的结果。
但是其中必须解决的矛盾：
线性扩增。如果用全基因组PCR扩增，因为PCR的扩增偏向性（bias）,再加上PCR过程 中较小的偏向性通过指数放大，其结果就会是严重的覆盖不均一，导致在许多地单细胞全基因组测序一直是生物学家梦想得到的结果。
但是其中必须解决的矛盾：
线性扩增。如果用全基因组PCR扩增，因为PCR的扩增偏向性（bias）,再加上PCR过程 中较小的偏向性通过指数放大，其结果就会是严重的覆盖不均一，导致在许多地方只有很低 的覆盖、甚至没有覆盖。所以，保证模板被线性地扩增，是首要问题。
全基因组覆盖。常规的建库方法，因为补平、加A、接头连接效率的问题，起始DNA中 有很大一部分会被浪费，没有形成有效文库分子（也就是两头都接好引物的DN***段）。在 单细胞测序中，这是不可接受的。
高扩增效率。单细胞中的每个基因位置理论上都只有2个拷贝，而要从2个拷贝扩增到足 够建立文库的DNA量，要经过许多次的扩增。这就需要很高的扩增效率。而一般的线性扩 增很难有好的扩增效率
谢晓亮教授创新的 MALBAC方法（multiple annealing andlooping-based amplification cycles）， 一举解决了上述3个问题，达到：1. 线性扩增， 2. 近乎全覆盖， 3. 高扩增效率（高产量）， 并且最终可以用
原理：
第一步
Quenching
S#ni-siniplkx)n!
at OC
EKten&ion
atGS'C
Meeting
at94 G ■
用5'端有27个统一序列，而3'端是8个随机序列的引物，作为扩增引物。用随机引 物保证可以在模板链上的各处随机结合
0°C淬火，再65°C等温扩增，得到第一轮的复制的产物
n 个扩增产物（在图中标成蓝色），这些扩增产物都有在5 '端有一个统一的引物
1 个原来的模板（在图中标成黑色）
用有前链移开功能的聚合酶（®29聚合酶）来进行扩增，这种酶的特点是会把酶前行方 向上的前链从原来的模板链上进行解链、移开。利用这种特点，可以让模板上的每个点在第 一轮反应中，都有机会得到n个拷贝
巧妙之处：
0C淬火，在延伸开始之前，就把n个引物杂交到模板上
®29聚合酶可以把前面的链给推开，结合前面的淬火步骤，一次复制出n个扩增子
第 2 轮起的 m 轮扩增
Melting
aiS4'C
■IJ-I
IlLIi
fl
Ou^nehing aE 0 C
^pttenEiun
atGS'C
mi
Malt；ng .
atS4'C e
m >< tl
人
ii^i
Loopinq
at 5B'C
Genomic DNA
■ III
Semi-amplicon
* 〜半护増产物
Full-amplicon
Lt V
完整扩増产物
护增引物统一凉列 与扩増引物蜿一
序列互补的厚列
MedSci
每个循环
先0°C淬火，再65°C扩增
粘到第一轮所产生的扩增产物上的引物，又会产生一轮扩增。其产物 5'端带有统一引物 序列， 3'端带有与统一引物序列，称为完整扩增产物
粘到原始模板上的引物，也产生一轮扩增。但是其产物是只在 5'端带有统一