文档介绍：医学微生物学实验指导
西安交通大学医学院
微生物学教研室
实验内容1. 实验内容2. 实验内容3. 实验内容4.
第一次实验课内容
实验目的与要求
实验室规则
细菌形态学观察技术
染色标本的制备一革蓝染色
实验目的与要求
8~12小时培养物，置于盖玻片中央。
反转凹玻片，使凹窝对准盖玻片中央，盖于其上，轻压后，迅速翻转玻片，使盖破片面向上。
标本片置于显微镜载物台上，先用弱光线，低倍镜找物象，再改换高倍镜观察，密切注意，勿 压破盖玻片。
观察：细菌在镜下为灰色半透明体，并呈现真运动，如在明亮的海洋中，深入浅出游来动去。
（二）压滴法
用途同悬滴法。
【材料】
细菌：枯草杆菌8~12小时肉汤培养物。
载物玻片：盖玻片等。
【方法】
取无油污物玻片1张。
用接种环沾取枯草杆菌8~12小时肉汤培养物置于载物玻片中央。
加盖玻片于菌液表面，观察方法同悬滴法。
三、细菌染色标本片的制备（操作）
由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、 构造及染色特性等，在细菌和鉴别上有重要意义。
【材料】
葡萄球菌大肠杆菌18~24小时普通琼脂斜面培养物。
革兰染色液。
生理盐水，载物玻片，接种环等。
【方法】
（一） 细菌涂片的制作
涂片：取清洁无油污载物玻片一张，接种环沾取生理盐水1~2环置于玻片中央，再将接种环火 焰灭菌待冷后，沾取葡萄球菌或大肠杆菌菌苔少许，混于生理盐水中，轻轻涂成均匀薄膜。
干燥：室温自然干燥，也可将涂面向上，远离火焰上方微加温干燥（切勿加热过度，以防将标 本烧枯）。
固定：标本干燥后，通过酒精灯火焰三次（约2~3秒钟），以杀死细菌并使之固定于玻片上。
染色：可根据不同的染色要求，用相应染色液进行染色。
（二） 革兰染色法：涂片的制备方法同前，革兰染色方法可分为四步。
初染：于涂抹面上滴加结晶紫染液数滴，覆盖整个涂面，室温作用一分钟。用自来水轻轻冲 洗，甩干水分。
媒染：滴加鲁戈碘液，室温作用一分钟，自来水冲洗，甩干水分。
脱色：将载物玻片浸于95%酒精缸中，上下提取，边提边看，见涂面无色素下流为止（约30秒 钟）。自来水冲洗，甩干水分。
复染：加稀释复红染液染30秒钟，自来水冲洗，吸水纸吸干玻片水分。
加油镜检：染色片待干后，于油镜下，调强光视野观察，呈紫色的为革兰阳性菌，呈红色的为 革兰阴性菌。
（三）美兰染色法
【方法】
将涂片固定滴加美兰染液于玻片上，染1~2分钟，水洗、待干、镜检。
【结果】
此法为单染色法，菌体和细胞均染成蓝色。常用于脑膜炎球菌及白喉杆菌等细菌染色。
四、细菌基本形态和特殊结构观察
（一） 基本形态（示教）
球形：葡萄球菌革兰染色标本片——菌体正园形，染成兰紫色，呈现葡萄串状排列。G+球菌。
杆形：大肠杆菌革兰染色标本片一一菌体短杆状，染成红色，呈分散排列。G杆菌。
螺形：霍乱弧菌革兰染色标本片一一菌体弧形，染成红色，呈分散排列。G弧菌。
（二） 特殊结构示教
鞭毛：伤寒杆菌鞭毛染色片一一菌体较粗大杆状，染成兰灰色，单个或成堆存在，周围可见到 波浪状弯曲、较长、呈兰灰色的鞭毛。
荚膜：肺炎双球菌荚膜染色片一一视野背景为红色，其中可见到染色呈深红色，矛头状菌 体，纵向成双排列，菌体周围有未染上颜色的空白区，即荚膜。
芽胞：破伤风梭菌芽胞染色片一一菌体为细长杆状，顶端有染成红色、并大于菌体的球状物即 芽胞，呈“鼓槌状”，其他散乱分布的红色球体，为菌体脱落的成熟芽胞。
《附录》
革兰（Gram）染液的配制
结晶紫染液
将1份结晶紫酒精饱和液与4份1%草酸铉水溶液混合即成（14克结晶紫加95%酒精100毫升即为酒 精饱和溶液）。
鲁戈（Lugol）碘液
碘1克碘化钾2克蒸馅水300毫升
稀释复红液
1份磴性复红饱和液（%酒精100毫升中。即为磴性复红饱和溶液）力口9份5% 石炭酸水溶液，先配成石炭酸复红染液（抗酸染色用），取1份石炭酸复红染液加9份蒸馅水即为稀释 复红染液。
第二次实验
实验内容1;细菌培养技术（操作）
实验内容2；细菌的生化反应检测（示教）
实验内容3：播放录象一《细菌感染的检查方法和防治原则》
实验二细菌培养技术
给细菌提供适宜的条件，细菌即可以生长繁殖，形成具有一定特征的培养物，学****细菌培养技 术可以纯化细菌，了解细菌的生长特征，并能进一步检测细菌生化反应、变异性，制备细菌抗原，深 入进行分子生物学工作等。了解细菌的培养特征也有助于鉴别细菌。
细菌培养基的制备
培养基是用人工方法将适合细菌生长繁殖的各种营养物配制而成的营养基质，以供细菌培养使 用。一般培养基的主要成份为蛋白质、糖类、