文档介绍：trizol-LS-试剂使用中文说明书
TRIzol LS 试剂(ambion)（中文说明书）
货号规格室温贮存
1029见混匀样品步骤）5min。
。盖紧离心管的盖子。
使劲地手摇离心管15s。
室温静置2-15min。
4℃下，12,000*g离心样品15min。
注意：混合物被分为3层，上层是澄清的水相，中间层，下层是红色的酚-氯仿相，只有RNA被排除在水相里。上层水相体积约占TRIzol LS试剂最初体积的~70%。
倾斜离心管为45°，小心地用移液器吸走水相，避免吸到中间层或者有机层。
将水相移到新的离心管，然后进行RNA分离
步骤。
如果需要分离DNA和蛋白质，则保持中间层和酚-氯仿相有机层。详见DNA分离步骤和蛋白质分离步骤。有机相可在4℃保存过夜。
RNA分离步骤
当制备和处理RNA时，需要采取适当措施避免RNase污染。
RNA沉淀
（可选）当沉淀从少量样品（<106细胞或者<10mg组织）提取的RNA，需要添加5-10μg不含RNase的糖原作为水相的载体。注意：糖原是RNA的辅助沉淀剂，浓度≤4mg/ml时不会抑制第一链合成，也不会抑制PCR。
%异丙醇到水相。
室温静置10min。
4℃下，12,000*g离心10min。
注意：离心前，RNA通常看不见，离心后，在离心管底部和侧面可见丝状沉淀物。
进行RNA洗涤和重悬
RNA洗涤和重悬
移走离心管里上清液，只留RNA沉淀。
LS试剂加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀。涡旋，混匀样品。
4℃下，7500*g离心5min，弃上清液。
真空或者空气干燥RNA沉淀5-10min，不要用真空离心干燥机干燥RNA沉淀。
注意：不要让RNA沉淀干燥太彻底，否则RNA沉淀溶解度降低，会使A260/280<。
%SDS（20-50μL）重悬RNA沉淀，移液器上下轻轻吹溶液几次。
注意：如果要用于随后的酶反应中，%SDS里。
在水浴槽55-60℃孵育10-15min。
继续下游操作或者储存在-70℃。
DNA分离步骤
从相分离步骤中保存的中间层和酚-氯仿层提取DNA。
DNA沉淀
移走覆盖在中间层上的残留水相层，这是涉及到DNA提取质量的关键一步。
100%乙醇。
盖紧离心管，上下颠倒几次，混匀样品。
室温静置2-3min。
4℃，2000*g离心5min，沉淀DNA。
移走酚-氯仿层，如果需要提取蛋白质，则保留在新的离心管中。该上清液可在-70℃下保存数月。
对DNA沉淀进行DNA洗涤和重悬。
DNA洗涤和重悬
LS试剂加入1ml柠檬酸钠/乙醇溶液（10%，）。
室温静置30min，不定时轻轻地上下倒置混匀。
注意：DNA能在柠檬酸钠/乙醇溶液里保存2h。
4℃，2000*g离心5min，弃上清液。
再次洗涤（重复步骤1-3）。
注意：当DNA沉淀较多（>200μg）时，重复洗涤两次。
-2ml75%乙醇。
注意：DNA样品在75%乙醇4℃能保存数月。
室温静置10-20min，不定时轻轻地上下倒置混匀。
4℃，2000*g离心5min，弃上清液。
真空或者空气干燥DNA沉淀5-10min，不要用真空离心干燥机干燥RNA沉淀。
– μg/μL 浓度用8mM NaOH重悬DNA，每50-70mg组织或者1*107细胞加入8mM NaOH -。
注意：我们高度建议用温和碱溶液重悬DNA，因为分离的DNA在水或者Tris缓冲液中重悬效果不好。
4℃，12,000*g离心10min，移走不溶物质。
将含DNA的上清液转移到新的离心管中，若需要，用HEPES调节PH，进行下游操作。DNA能在4℃保存过夜，要想长期保存，则需用HEPES
调节PH7-8，添加1mM EDTA，保存在4℃或者-20℃。
DNA和RNA产量测定
用RNA和DNA在260nm和280nm处的吸收值测定浓度。
预期产量
下表列出了各种来源材料提取RNA（A260/280>）和DNA（A260/-）的标准产量
蛋白分离步骤
从DNA沉淀步骤后留