文档介绍：1 Wistar 大鼠 EAE 模型的制备作者: 刘颖刘华辛晋敏马太花梁丽云马存根摘要目的: 检测 EAE 中起关键趋化作用的 MCP-1 的表达, 探讨山西医科大学动物室的 Wistar 大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法: 采用免疫诱导方法制备 EA E 模型并 HE 染色,同时用原位杂交法检测 EAE 大鼠 MCP- 1 的表达。结果: 免疫后 12d ~ 17d , 发病鼠出现 EAE 临床症状, HE 染色,光镜下可见血管周炎性浸润, MCP-1 的表达明显增加。结论: 山西医科大学 Wistar 大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。关键词完全抗原;Wistar 大鼠;EAE;MCP-1 多发性硬化( Multiple Sclerosis , MS ) 是中枢神经系统( CentralNervous System , CNS )的炎性脱髓鞘疾病,多发于 20 岁~ 40 岁女性, 大多数患者的病程为复发和缓解交替, 在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。 MS 病因和发病机制复杂, 一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因 2 素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎( ExperimentalAu-toimmune Encephalomyelitis , EAE )的病理变化及发病机制与急性 MS 极其相似,因此,成功的建立 EAE 模型对 MS 的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1 材料与方法 试验材料 Wistar 大鼠: 购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒: 购于武汉博士德生物制品公司。 方法 完全抗原的制备: 取液体石蜡 40mL , 羊毛脂 20g 混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂( plete Freund ’ sAdjuvant , IFA ) ,分装入 10mL 小瓶,高压灭菌后 4 ℃冰箱保存。健康 350g ~ 450g 左右雌性豚鼠用 3% 戊巴比妥 45mg/kg 腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下,剪开胸腔、剥离心包, PBS 左心室灌注直至肝脏变白; 迅速取其脑脊髓, 小心剥离脑脊膜后称重, 加入等量生理盐水,制成 50% ( W/V ) 匀浆。同时融化 IFA , 1mL IFA 加入约 10mg 的 即制得 CFA 。将 CFA 与 GPSCH 等体积混合, 用注射器反复抽推, 制成油包水乳液, 制成完全抗原, 放置 3 冰上备用。 模型制备: 将健康、雌性 Wistar 大鼠 30 只,随机分成正常对照组、佐剂组和 EAE 组, 三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原 / 只,百日咳原液 / 只( 含 × 109 个菌体) 。记免疫当日为零天,每天称重,采用双盲法两人进行临床症状评分, 取平均值, 临床评分 2 分为发病动物,临床评分采用通用的五分评分法,即:0 分无症状, 1 分动物尾部肌张力降低,2 分动物尾部麻痹+ 后肢肌张力低, 3 分尾麻痹+ 后肢肌张力重度低, 4 分尾麻痹+ 四肢麻痹, 5 分频死状态。发病动物只数/ 实验动物只数为发病率。免疫后 12d ~ 17d , 3