文档介绍：地鳖虫活性蛋白对人舌癌细胞Tea-8113的抑制作用
【摘要】目的研究地鳖虫蛋白对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制作用，探究地鳖虫蛋白质的抗肿瘤活性。方法采用TT法测定地鳖虫蛋白质对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制效果。结果地质对舌癌Tea-8113细胞生长、增殖的影响，为EES抗肿瘤临床应用及其作用机制的深化研究提供实验根据。
1材料与仪器
-8113细胞株由中山大学附属肿瘤医院细胞库提供，用含10％小牛血清、100U/l青霉素和100U/l链霉素的RPI1640培养基，37℃，5％2培养箱中，完全饱和湿度条件下培养，3～4d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。
〔雌性〕购自广州市花鸟市场，由广东工业大学生药研究室鉴定。RPI1640培养液、小牛血清均为美国GIB公司产品，TT〔噻唑兰〕、二***亚砜、胰蛋白酶均为美国ARES公司产品，超纯水自制，其余试剂均用国产分析纯。常规培养。
，倒置显微镜购自重庆奥特光学公司，超净工作台为苏净集团产品，680型酶标仪购自美国BI-RAD公司。
2方法
〔EES〕的制备取200g新颖地鳖虫剪碎，(),匀浆，再加300l上述缓冲液，4℃浸提过夜，4000r/in离心20in，弃沉淀，上清用sevag法提取蛋白质，搜集40%～65%饱和度盐析组分［4］，透析除盐，层析别离并搜集蛋白质组分，/-Hl缓冲液梯度洗脱,恒流泵流速为40，10in搜集1管。分别搜集各蛋白峰液体，真空冷冻将蛋白质制成粉末备用。
-PAGE电泳［5］采用SDS-PAGE法分析制备蛋白质组成。浓缩胶浓度5%，别离胶浓度12％，考马斯亮蓝G－250染色，甲醇/冰乙酸脱色。由低标准蛋白质绘制标准曲线，测定测试样品的迁移间隔 ，计算相对迁移率(R)，由标准曲线求得测试样品的分子量。
-8113细胞的体外抑制作用〔TT法〕［6］%胰蛋白酶消化贴壁生长的Tea-8113细胞，×104／l细胞悬液接种于96孔培养板中,每孔100μl，培养15h细胞贴壁后，分别参加PBS(阴性对照)以及终质量浓度〔，，，〕的EES各20μl，每组均设4个复孔。置饱和湿度、37℃、5%2培养箱中培养24，48，72h,完毕前4～6h各培养孔分别参加5g/lTT20μl,继续培养4h，弃培养上清液,每孔参加二***亚砜〔DS〕200μl溶解液，用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度(A)值,测定波长为490n,用不含细胞培养液而同样作其他处理组作本底,校正测量值,取4孔A值平均数,按以下公式计算抑制舌癌细胞的生长抑制率。
细胞增殖抑制率〔％〕=［1-(D实验组-D空白组)/(D对照组-D空白组)］×100％
，结果以±s表示。实验均重复3次。
3结果
〔EES〕的别离纯化地鳖虫经