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布鲁氏菌试管凝集试验.ppt

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布鲁氏菌试管凝集试验.ppt

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布鲁氏菌试管凝集试验.ppt

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文档介绍

文档介绍:关于布鲁氏菌试管凝集试验
第一张,共三十五张,创建于2022年,星期二
免疫学基础
第二张,共三十五张,创建于2022年,星期二
由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长,所以布鲁氏菌的血清学诊断越来越受到重视。
第三十五张,创建于2022年,星期二
结果的判定
判定比浊管的制备:每次试验须配制比浊管作为判定的标准依据.
配制方法是:取本次试验用的抗原稀释液(一般1:10)5-10毫升,%石碳酸生理盐水作倍比稀释,按下表配制比浊管
比浊管的配制
第十九张,共三十五张,创建于2022年,星期二
试管凝集反应标准比浊管配制
管号 抗原稀释液(ml) 生理盐水(ml) 透明度 标记
1 100% ++++
2 75% +++
3 50% ++
4 25% +
5 0% -
第二十张,共三十五张,创建于2022年,星期二
结果记录
根据各管中上层液体的清亮程度记录结果,特别是50%清亮度(++)对判定结果关系较大,一定要与比浊管对比判定
血清对照为清亮透明无沉淀,抗原对照为均匀混浊在两种对照管都成立的情况下,才可判定试验管,否则应重做。对沉淀需要经验判定。
第二十一张,共三十五张,创建于2022年,星期二
“+++” 几乎完全凝集,上清液75%清亮
“++”显著凝集,上清液50%清亮
“+” 微量凝集,液体25%清亮
“-” 无凝集,液体不清亮
确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的凝集现象的最高血清稀释度
“++++”完全凝集,上清液100%清亮
第二十二张,共三十五张,创建于2022年,星期二
诊断标准
没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是:
人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1:100( ++)及以上者为阳性,1:50(++)为可疑。
猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1:50(++)及以上者为阳性,1:25(++)为可疑。
对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查,以便进一步确定诊断。
第二十三张,共三十五张,创建于2022年,星期二
影响试验结果的因素及注意事项
受检血清应新鲜、无溶血、无污染,存放血清处温度不能超过10℃,采血后应于3—4日内进行检查,因放置时间过长可能会导致血清效价降低。
遵守操作规程:所用的器材要清洁、干燥,试剂的加量一定要正确,放入温箱的温度和时间都要按要求,否则都影响结果。每份血清和抗原均要有对照。
高渗盐水作凝集反应,一般浓度在10~12%,一般切记人血清不能用高渗盐水。
第二十四张,共三十五张,创建于2022年,星期二
作凝集反应时,有个别血清会出现前带现象,即稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝集,而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝集,这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反应中出现了前带现象,那么做试管反应时应多做几个管,多采用几个稀释度。
氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响,盐的浓度越高,反应的敏感性提高,因此在兽医界为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰,对羊血清采用高渗盐水作凝集反应,一般浓度在10~12%,切记一般人血清不能用高渗盐水。
第二十五张,共三十五张,创建于2022年,星期二
前带现象产生的原因
① 胶体粒子学说:血清稀释度低所含的胶体粒子多,它影响抗原抗体的结合,而稀释度高的则含胶体粒子少,所以出现凝集。
② 不完全抗体学说:血清中因存在不完全抗体竞争抗原,所以在低稀释度的管中不凝集。
③ 抗原抗体比例失调,也就是抗体过剩或血清内含有过多防腐剂,严重污染可造成前带现象的产生,封闭抗原的干扰。
第二十六张,共三十五张,创建于2022年,星期二
评价
该方法特异性较好,敏感性也高,因