文档介绍：可溶性蛋白质含量的测定
可溶性蛋白质含量的测定
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可溶性蛋白质含量的测定
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植物体内可溶性蛋白质含量的测定
植物体内的可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，如在研
白蛋白。所用试剂均为化学纯或剖析纯。
【方法】
试剂的配制
(1)碱性铜试剂(相当于双缩脲试剂)的制备首先配制A液：4％碳酸钠(NA2CO3)溶
液与02Mol／L氢氧化钠(NAOH)溶液等比率混淆(2％NA2CO3，01Mol
NAOH)；B液：1％硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等比率混
合(05％CuSO4·5H2O，％酒石酸钾钠)。在使用前将A液与B液按50∶1
的比率混淆即成。此为ＦolIn—酚试剂甲液，此试剂只能使用1天。
酚试剂(相当于ＦolIn试剂)的配备：称取钨酸钠(NA2WO4·2H2O)100g、钼酸钠
(NA2MoO4·2H2O)25g，加蒸馏水700Ml溶解于1500Ml的圆底烧瓶中。之后加
入85％的H3PO450Ml，浓HCl100Ml，安上回流装置(使用磨口接头，若用软木
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塞或橡皮塞时，就必须用锡铂纸包起来)，使其慢慢沸腾10H。冷却后加入硫酸
锂(LI2SO4·H2O)150g，50Ml水，溴水2～3滴，不用回流装置开口煮沸15Min，
以释放出过度的溴。待冷却后稀释至1000Ml，并过滤入棕色瓶中，密闭于冰箱
中保留(冷却后溶液呈黄色，若是仍呈绿色，须再滴加数滴液体溴，持续煮沸
15Min)。使用时用标准NAOH溶液滴定，以酚酞作为指示剂，滴定终点由蓝变
灰，滴定后算出酸的浓度。使用时大概加水1倍，使最终浓度相当于1Mol／LH
＋酸，此为ＦolIn－酚试剂乙液(ＦolIn试剂)。
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在测准时要注意，因为酚试剂仅在酸性条件下稳定，但此实验的反响只在PH值
为10的情况下发生，所以当加酚试剂时，必须立刻混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被损坏前即能发生复原反响，否则会使显色程度减弱。
（2）标准蛋白质溶液的配制称取25mg牛血清白蛋白，溶于100Ml蒸馏水中，
使最终浓度为250μg／Ml。
标准曲线的绘制
1）取7支试管，编号后，分别加入0ml、、、、、、
，用蒸馏水补足1Ml，使每管含蛋白量分别为0μg、25μg、
50μg、100μg、150μg、200μg、250μg(必要)。时可做重复
(2)在每支试管中用定量加样器加入5Ml甲液，混匀，于30℃下放置10Min。
(3)在每支试管中喷射加入05Ml乙液，立刻振荡混匀，在30℃下保温30Min。
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(4)正确到30Min后，以不加标准蛋白试管中的溶液为空白，在500nM下用1CM
光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色，测定光密度值。
以蛋白浓度为横坐标，光