文档介绍：血球计数板

使用方法
血球计数板

使用方法

细胞悬液中细胞数量的计数一般使用血球计数板（hemocytometer
或 haemocytometer) 在显微镜下直接计数。其原理是，观察在一定的微量
容积中的细胞数目，然后推算出“每毫升细胞数”。其缺点是，包括死细
胞及微小杂物均被计算在内，所以，计数的结果可能偏高。这种方法常用
于个体较大的细胞或菌体（如人体血细胞，酵母菌等），不适合于普通细
菌（如大肠杆菌）和病毒（但某些昆虫的病毒，如多角体病毒，除外）。
不论计数的对象如何，均须制备分散的悬液。
一制备细胞悬液
不同细胞，制备悬液的方法不同。真菌细胞因有坚硬细胞壁，可以用
振荡器或超声波处理以助分散。这里以壁贴生长的哺乳动物为例，介
绍制备壁细胞悬液的一般贴步骤：
1）、终止培养，将培养液吸出，用 PBS 洗培养物一次。
2）、给培养瓶内加入毫升％胰蛋白酶溶液（培养瓶面积
为 25 平方厘米），于 37℃消化 3～5 分钟。
3）、期间不断在显微镜下观察。当细胞变圆脱壁时，加入一定量的
培养液（如 5 毫升）以终止胰蛋白酶的消化，并用吸管吹打以便细
胞更好的分散。
二计数与计算过程
1）、在血球计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用微量取样器吸取细胞悬液（一般 15-20 微升即可），沿计数
板凹蹧处加入，至盖玻片与计数板间的空隙被液体充满为止。
3）、在显微镜下按箭头方向计数四角内的细胞总数（每角有 16 小方
格，见下图 W 区)。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细
胞团按单个细胞计数。4）、按下式计算细胞密度。如果密度太大（如每个 W 区超过 500-100
0），可以先稀释 5-10 倍然后再重新计数，最后计算结果要乘以稀释
倍数。
细胞密度/毫升＝（4 个 W 区细胞总数/4）×10000 x 稀释倍数

三举例

有学生将样品稀释 100 倍后，数得 4 个 W 区的细胞总数为 520，那么
他的样品浓度（稀释前）是：

520/4 x 10