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血球计数板使用方法(更新).pdf

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血球计数板使用方法(更新).pdf

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血球计数板使用方法(更新).pdf

文档介绍

文档介绍:血球计数板

使用方法
血球计数板

使用方法

细胞悬液中细胞数量的计数一般使用血球计数板(hemocytometer
或 haemocytometer) 在显微镜下直接计数。其原理是,观察在一定的微量
容积中的细胞数目,然后推算出“每毫升细胞数”。其缺点是,包括死细
胞及微小杂物均被计算在内,所以,计数的结果可能偏高。这种方法常用
于个体较大的细胞或菌体(如人体血细胞,酵母菌等),不适合于普通细
菌(如大肠杆菌)和病毒(但某些昆虫的病毒,如多角体病毒,除外)。
不论计数的对象如何,均须制备分散的悬液。
一 制备细胞悬液
不同细胞,制备悬液的方法不同。真菌细胞因有坚硬细胞壁,可以用
振荡器或超声波处理以助分散。这里以壁贴 生长的哺乳动物为例,介
绍制备壁细胞悬液的一般贴 步骤:
1)、终止培养,将培养液吸出,用 PBS 洗培养物一次。
2)、给培养瓶内加入 毫升 %胰蛋白酶溶液(培养瓶面积
为 25 平方厘米),于 37℃消化 3~5 分钟 。
3)、期间不断在显微镜下观察。当细胞变圆脱壁时,加入一定量的
培养液(如 5 毫升)以终止胰蛋白酶的消化,并用吸管吹打以便细
胞更好的分散。
二 计数与计算过程
1)、在血球计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2)、用微量取样器吸取细胞悬液(一般 15-20 微升即可),沿计数
板凹蹧处加入,至盖玻片与计数板间的空隙被液体充满为止。
3)、在显微镜下按箭头方向计数四角内的细胞总数(每角有 16 小方
格,见下图 W 区)。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细
胞团按单个细胞计数。4)、按下式计算细胞密度。如果密度太大(如每个 W 区超过 500-100
0),可以先稀释 5-10 倍然后再重新计数,最后计算结果要乘以稀释
倍数。
细胞密度/毫升=(4 个 W 区细胞总数/4)×10000 x 稀释倍数

三 举例

有学生将样品稀释 100 倍后,数得 4 个 W 区的细胞总数为 520,那么
他的样品浓度(稀释前)是:

520/4 x 10

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