文档介绍：胆舒胶囊介绍
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薄荷素油十二指肠给药，能增加大鼠胆汁分泌量,有明显利胆作用，同时,轻度增加胆汁酸浓度,降低胆固醇浓度**
增加胆汁分泌量
双
重
途
径
利
胆
2
降低胆汁稠密度
1
定量测定胆汁透声度YP8B1
②
替代途径
27-羟胆固醇
3，7-二羟-5-胆固醇酸
7-羟-3-酮-4-胆烷酸
3，7-二羟-5-胆烷酸
鹅脱氧胆酸
3HSD
CYP27A1，CYP7B1
3，7-二羟-5-胆烷酸
经典途径
3，7，12-三羟-5-胆烷酸
7-4-胆固醇烯-3-酮
7-羟胆固醇
胆固醇
CYP7A1
3HSD
③FXR
①原材料摄入环节
LDLR
②胆酸合成关键蛋白
CYP7A1
CYP27A1
③胆酸转运关键蛋白
FXR
关键蛋白
胆汁的形成、代谢和转运
1、薄荷素油利胆关键基因差异表达研究
（1）胆固醇摄入肝细胞关键蛋白——LDLR
（2）胆酸合成限速酶关键蛋白 —— CYP7A1
CYP27A1
（3）调节胆汁酸的转运关键蛋白——FXR（细胞法呢醇X受体）
1、胆舒基因表达谱研究
（1）胆固醇摄入肝细胞关键蛋白——LDLR
（2）胆酸合成限速酶关键蛋白 —— CYP7A1
CYP27A1
（3）调节胆汁酸的转运关键蛋白——（细胞法尼酯X受体）
LDLR mRNA
CYP7A1 mRNA
CYP27A1 mRNA
FXR mRNA
研究方案介绍
1、细胞培养及药物处理
HepG2细胞常规维持培养在含5%小牛血清的DMEM培养基中，实验时以9×104/孔细胞密度接种到6孔细胞培养板，，
培养16～20h，加入不同浓度(50-200g/mL)薄荷素油，分别处理1、2、4、8、24h，收集细胞用于RNA制备。
2、RT-PCR分析CYP7A1基因表达水平
TRIZol提取细胞总RNA，采用RT-PCR分析检测细胞CYP7A1和FXR基因表达水平。（ CYP7A1和FXR以及内对照引物均由上海捷瑞生物有限公司合成）。
采用一步法进行RT-PCR扩增，扩增条件均为：50℃，30min；94℃，2min；94℃ 10s、55℃ 10s、72℃ 10s，大约25-30个循环；72℃，5min。
%的琼脂糖凝胶电泳检测。
3、数据统计学处理
结果以均数±标准差（ ）表示，两组数据间的比较用t检验。
图2-2 薄荷素油对LDLR mRNA表达的影响
1. 细胞对照， 2. 50g/mL， 3. 100g/mL， 4. 200g/mL
GAPDH
LDLR
处理细胞30min
LDLR存在于肝细胞膜上，其功能主要为摄取低密度脂蛋白（LDL），而胆固醇又以结合LDL的形式存在于血浆中，依靠肝细胞膜上的LDLR作用，胆固醇被摄取进入细胞，用于固醇类激素和胆汁酸的合成。
图2-3 薄荷素油对7α-羟化酶（CYP7A1 mRNA）表达的影响
1. 细胞对照， 2. 50g/mL， 3. 100g/mL， 4. 200g/mL
处理细胞30min
CYP7A1
GAPDH
CYP7A1是胆酸合成限速酶，启动胆酸合成的经典途径。此途径首先通过一系列酶促反应，最终将胆固醇催化为熊脱氧胆酸和胆酸，与牛磺酸甘氨酸结合形成初级胆汁酸，随胆汁流入胆管并在胆囊贮存。
图2-4 薄荷素油对细胞27α-羟化酶（CYP27A1 mRNA）表达的影响
1. 细胞对照， 2. 200g/mL， 3. 100g/mL， 4. 50g/mL
CYP27A1
GAPDH
处理细胞30min
CYP27A1也为胆酸合成的限速酶，启动胆酸合成的替代途径，在人体中约18%的胆酸合成通过替代途径，由此途径生成的产物为鹅脱氧胆酸。
（三） 薄荷素油对细胞法尼酯X受体（FXR）表达的影响
FXR
GAPDH
1. 细胞对照， 2. 200g/mL， 3. 100g/mL， 4. 50g/mL
处理细胞30min
FXR为胆汁酸感受器，也是胆汁酸的受体，调控参与胆汁酸代谢的靶基因，从而调