文档介绍：高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量【关键词】高效摘要:采用高效液相色谱法中的梯度洗脱测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量。结果显示,所测得的二组分的含量和相对标准偏差分别为 % 、 % ; 、 % ,提示该法操作简单, 结果可靠,与药典法没有显著性差异。关键词:高效液相色谱法;梯度洗脱;大黄素;大黄酚大黄是我国临床常用的中药之一,素有“将军”之称,在中药复方中应用相当广泛,有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效,《神农本草经》称大黄“主下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚、留饮、宿食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏”。人们对大黄的研究日益加深,相继发现了新的活性成分。大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等 150 多种成分。大量的研究表明,大黄的诸多制剂均以保存总蒽醌为目的。本研究采用高效液相色谱法中的梯度洗脱直接测定经甲醇简单提取后的样品中的大黄酚和大黄素的含量,结果可靠。 1 仪器与试剂 11 仪器 HP1100 型高效液相色谱仪( 美国惠普公司) ,包括四元泵、真空脱气机、柱温箱、紫外检测器。色谱柱: Hypersil ODS × μ m ;预柱:C18( × 50mm)5 μ m) (大连依利特公司)。 12 试剂大黄素、大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所;大黄生药材为市售(产地为甘肃、四川);乙腈为色谱纯,其余为分析纯。 2 方法与结果 21 色谱条件 NH4OAC 水溶液( PH= ):乙腈=A:B ;梯度洗脱: 0 分钟 A:B=71:29 , 12 分钟 A:B=21:79 , 14 分钟 A:B=21:79 , 15分钟 A:B=71:29 。检测器:紫外检测器;波长: 436nm ;流速: ;进样体积: 10μ l ;柱温箱温度: 25℃。 22 标准曲线的绘制精密称取大黄素、大黄酚对照品各分别置于 10ml 容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即为大黄酚和大黄素的标准贮备液,浓度为 2mg/ml 。以标准贮备液为基础,以甲醇为溶剂准确配制浓度为、、、、系列浓度。精取 10μl 注入液相色谱仪中以对照品峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标绘制标准曲线,其回归方程为: C 大黄素= × 10-7A + , r= , C 大黄酚= × 10-7A + , r= 。在本研究色谱条件下,当信噪比为 3 时测得大黄素和大黄酚的最低检出浓度为 μ g/ml 和 μ g/ml 。 23 精密度试验取样品测定项下配制的供试品溶液在一日内不同时间 0、2、 4、 8、 12 小时内进行 HPLC 分析测得日内精密度和连续 7 日内进行 HPLC 分析测得日间精密度。结果大黄素和大黄酚在日内 RSD 分别为 % 和 % ;日间 RSD 分别为 % 和 % 。见表 1、2 。表 1 日内精密度(略) 24 加样回收率试验取已知含量的大黄生药材