文档介绍：高效液相色谱方法及应用
主讲人：王英特
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第一章 绪论
色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。
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第一节 高效液相色谱法的特点
一、与经典高效液相色谱方法及应用
主讲人：王英特
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第一章 绪论
色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。
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第一节 高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较
二、与气相色谱法比较
三、高效液相色谱法的特点
1．分离效能高
2 ．选择性高
3 ．检测灵敏度高
4 ．分析速度快
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第二节 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类
1、吸附色谱（Adsorption Chromatography）
2、分配色谱（Partition Chromatography）
3、离子色谱（Ion Chromatography）
4、体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography）
5、亲和色谱（Affinity Chromatography）
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按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较
吸附色谱
分配色谱
离子色谱
体积排阻色谱
亲和色谱
固定相
全多孔固体吸附剂
固定液载带在固相基体上
高效微粒离子交换剂
具有不同孔径的多孔性凝胶
多种不同性能的配位体键联在固相基体上
流动相
不同极性有机溶剂
不同极性有机溶剂和水
不同pH值的缓冲溶液
有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液
不同pH值的缓冲溶液，可加入改性剂
分离原理
吸附与解吸
溶解与挥发
可逆性的离子交换
多孔凝胶的渗透或过滤
具有锁匙结构络合物的可逆性离解
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第三节 基本原理
一、色谱过程
二、分配系数与保留行为的关系
1．分配系数及容量因子
2．保留时间
3．tR与K的关系
4．分配系数不等是分离前提
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第二章 高效液相色谱仪简介
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第一节 流动相及贮液罐
一、贮液罐
二、流动相脱气
（1）吹氦脱气法
（2）加热回流法
（3）抽真空脱气法
（4）超声波脱气法
（5）在线真空脱气法
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第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵
高压输液泵可以分为以下两类：
1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流动相。
（1）注射式泵（又称注射式螺杆泵）
（2）往复型泵
2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。
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二、输液系统的辅助设备
1．管道过滤器
2．脉动阻尼器
三、梯度洗脱装置
1．低压梯度（外梯度）
2．高压梯度（内梯度）
3．影响梯度洗脱的因素
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第三节 进样装置
一、停流进样装置
二、六通阀进样装置
三、自动进样器
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第四节 色谱柱
一、柱材料及规格
1．柱材料
2．柱规格
二、柱连接方式
三、柱温控制
四、柱填充技术
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第五节 检测器
常用的检测器为紫外吸收检测器（UVD）、折光指数检测器（RID）、电导检测器（ECD）和荧光检测器（FD）。
近几年出现的蒸发激光散射检测器（ELSD）有望成为高效液相色谱全新的通用灵敏的质量检测器。
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一、检测器的性能指标
（1）噪声
（2）基线漂移
（3）灵敏度
（4）线性范围
（5）检测器的池体积
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二、紫外吸收检测器
1．固定波长紫外吸收检测器
2．可变波长紫外吸收检测器
3．光二极管阵列检测器
三、折光指数检测器
四、电导检测器
五、荧光检测器
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第三章 键合相色谱法
根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，可将键合相色谱法分为正相键合相色谱法和反相键合相色谱法。在正相键合相色谱法中，键合固定相的极性大于流动相的极性；在反相键合相色谱法中，键合固定相的极性小于流动相的极