文档介绍：微生物学实验
微生物学实验进度表
实验周次 实验内容 备注 1 实验室常用器皿介绍 基础 2 微生物试验技能训练 基础 3 实验一 实验室和人体表面微生物的检查 验证 4 实验二 细菌的简单染色和普通光学显微镜的使用 验证 5 实验三接种环提起垂直放在火焰上，以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此很快地来回通过火焰数次。
左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并冷却了的接种环(可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫)，通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直到平板的一半处。注意:接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。
闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷。接种环通过前面划的线条再在琼脂的另一半，从上向下来回划线至1,2处。 烧灼接种环，转动平板，划最后1,4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
3、人体细菌的检查
(1)手指(洗手前与洗手后)
(2)鼻腔 按照实验台检查法的步骤?，取出棉签，并将其弄湿。用湿棉签在鼻腔内滚动数次，按实验台检查法的步骤?和?接种与划线，然后盖上皿盖。
4、将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放37?培养箱，培养1-2d 5、结果记录方法
(1)菌落计数 在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数，不是划线的平板，也一分为四，数1/4面积的菌落数。
(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。
菌落特征:大小、颜色、干湿情况、形态、高度、透明程度、边缘。
菌落特征描写方法如下:
?大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。
?颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。
?干湿情况 干燥、湿润、粘稠。
?形态 圆形、不规则等。(e)高度扁平、隆起、凹下。
?透明程度 透明、半透明、不透明。
?边缘 整齐、不整齐。
五、实验报告
P13:结果1、思考题3、4
1 比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多,
2 人多的实验室与无菌室(或无人走动的实验室)相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别,你能解释一下造成这种区别的原因吗,
3 通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么,有什么体会, 六、实验总结
实验二 细菌简单染色和普通光学显微油镜的使用和细菌形态观察 一、目的要求
1(学****微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。 2(熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。
3(学****并掌握油镜的原理和使用方法。
三、油镜物镜的基本原理
微生物学研究用的显微镜的物镜通常有低倍物镜(16mm，10×)、高倍物镜(4mm，40,45×)和油镜( mm，95,100×)三种。油镜通常标有黑圈或红圈，也有的以“OI(oil immer-sion)字样表示，它是三者中放大倍数最大的。根据使用不同放大倍数的目镜，可使被检物体放大1000,2 000多倍。油镜的焦距和工作距离(标本在焦点上看得最清晰时，物镜与样品之间的距离)最短，光圈则开得最大，因此，在使用油镜观察时，镜头离标本十分近，需特别小心。 使用时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n=，与玻璃相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系，当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就减低了视野的照明度。
利用油镜不但能增加照明度，更主要的是能增加数值孔径，因为显微镜的放大效能是由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称为镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，可用下列公式表示:
n?sinα 式中 NA=数值孔径;n=介质折射率;α=最大入射角的半数，即镜口角的半数。 NA,
因此，光线投射到物镜的角度愈大，显微镜的效能就愈大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。
所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。例如，美蓝