文档介绍：用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用答辩人:张承导师:蔡继文教授1选题意义1. 自由基是一种外层轨道上含有未配对电子的原子、原子团或呈特殊状态的分子。2. 机体内自由基大量产生或清除过缓,使积累超过临界水平后, 就会对机体产生损伤,各种炎症、癌症、脏器损伤、老化等都与自由基密切相关。(一) 自由基概述及其危害(二) 中药以及中药配方颗粒中药抗氧化剂具有经济和毒、副作用小等明显的优点, 在中草药中, 有许多药物都对自由基有清除作用。中药配方颗粒品质优良,效果客观,使用简便快捷,必将成为21世纪中医药配方的主流。因此研究它的药性有着重要的意义。(三) 测定自由基清除率的方法电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、紫外分光光度法、荧光分光光度法等。本实验采用用仪器简单,操作方便的荧光分光光度法对中药消除自由基的性能进行研究。+-EDTA在弱碱性介质中可还原溶解氧产生·OH,其进攻对苯二甲酸产生强荧光羟基化产物2-羟基对苯二甲酸(HOTP) . ·OH清除剂加入后, 导致HOTP 的生成量减少,从而体系荧光强度明显降低。2实验内容2. 仪器日本岛津RF-5301PC荧光分光光度计,激发波长316 nm,测定发射光谱。 3. 试剂及反应体系对苯二甲酸钠溶液(1. 0 ×10- 4mol/ L); Fe2 + ( 硫酸亚铁溶液,1. 0 × 10- 3 mol/ L); EDTA(1. 0 ×10- 3mol/ L);磷酸钠缓冲溶液(0. 2 mol/ L ;pH =7. 4) ,山茱萸等中药配方颗粒。 mL, EDTA 溶液0. 3 mL, ;Fe2 + mL, mL , mL ,反应6 min后测定体系荧光强度。(1).不加中药时体系的发射光谱123由此可见,羟基对苯二甲酸是体系的唯一的强荧光物质,自由基或者是对苯二甲酸本身不产生荧光。峰值位置为426nm 1:对苯二甲酸+Fe2++EDTA 2:与1相比,无对苯二甲酸钠3:与1相比,体系中没有加入Fe2+(2)测定中药自身的发射光谱,激发波长316nm为减小误差,选择了在426nm处的荧光强度值相对较小的中药:半支莲,山茱萸,茶多酚,黄芩,红花,桂枝,地龙,柴胡,猪苓(3)(%)[F0-(F- F′)]/F0加入中药后荧光强度F 中药自身荧光强度F′中药名C=