文档介绍：实验菠菜色素的提取和色素分离
(extraction of pigments from spinach and chromagraphic isolation)
【实验目的】
（1） 通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯。本实 验从菠菜中提取上述几各色素，并通过薄层层析进行分离。
叶绿素存在两种结构相似的形式——叶绿素a （C55H72O5N4Mg）以及叶绿素b （C55H加06N4Mg）, 其差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是毗咯衍生物与金属镁的络合物，是植物 进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一 些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，瞄-，8 -和Y -胡萝卜素，其 中8 -异构体含量最多，也最重要。在生物体内，8 -体受酶催化氧化即形成维生素人。目前8 -胡萝 卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H5602）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
叶绿素a（R = CH3）
叶绿素b（R = CHO）
【实验试剂】
20g菠菜叶，20mL甲醇，40mL石油醚（60〜90°C）一甲醇（3:2）溶液，硅胶G，%羧甲基 纤维素钠，无水硫酸钠，石油醚一丙酮（8:2），石油醚一乙酸乙酯（6:4）
【实验步骤】
1、薄层板的制备
取四块显微载玻片，洗净晾干。
在小烧杯中，，%羧甲基纤维素钠水溶液6〜7mL，调成均匀的糊状， 其稀稠为在震动下可流动，倒在洁净的载玻片上，用食指和拇指拿住玻璃板，前后左右振摇、摆动， 并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整、无气泡的薄层板，〜。
涂好后的硅胶G薄层板置于水平的玻璃板上，（注意：室温放置必须使玻 板干透，否则会出现断裂现象），放入烘箱中缓慢升温至110C，〜1h后取出，稍冷备用。
2菠菜色素的提取
称取20g洗净用滤纸吸干的的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与20mL甲醇拌匀，在 研钵中研磨约5min然后用布氏漏斗抽滤菠菜汁，弃去滤液。
将菠菜汁放回研钵，每次用20mL 3:2 （体积比）的石油醚-甲醇混合液萃取两次，每次需加以研 磨充分并且抽滤。
注意：因石油醚易挥发，抽滤时先倒少许清液浸润滤纸，抽滤时真空度不要太大！
合并滤液，用吸管取上层深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用10mL水洗涤两次，以除去萃 取液中的甲醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。
弃去水一甲醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥30min后，滤入圆底烧瓶（勿将干燥剂滤入）在 水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为1mL为止。石油醚回收。
3、 点样
取活化后的层析板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。另一端距约1cm处 也划一横线作为终止线。取毛细管（）插入样品溶液中，在一块板的起点线上点两个点。 样点间相距1〜。样点直径不应超过2mm。
注意：点样时手指捏住毛细管