文档介绍：第一章免疫细胞化学基本概念及发展简史
免疫细胞化学（immunocytochemistry ）是利用特异性抗原抗体 反应，观察和研究组织细胞特定抗原（或抗体）的定位和定量的技术。
应用免疫细胞化学技术可以在
免疫球蛋白类抗原可选用含***类的固定液，（如Zenker固定
液），或蛋白沉淀性固定液（如Bouin固定液，甲醛醋酸酒精固定液 等）。扁桃体、淋巴结和骨髓还可用甲缩醛（formal-Saline）加2-10% 醋酸，石蜡切片，能有效地保存Ig。
肿瘤胚胎抗原（如甲胎蛋白AFP、癌胚抗原CEA）对多种固定均
稳定。
般可用中***尔马林固定，石蜡包埋切片）
激素类中的多肽类激素宜选用Bouin。
组织之中酶和一些组织特殊抗原（如肌球蛋白、凝血蛋白和第
VIII凝血因子等）可用10%中性甲醛。
待测抗原与固定液的关系
抗原
适用固定液
细胞表面抗原
100%***，95%乙醇，10%福尔马林，Bouin液
免疫球蛋白
Zenker固定液，10%福尔马林，95%乙醇，100%***，
酶，蛋白类
10%福尔马林，Bouin液，95%乙醇，100%***
肽类激素
Bouin液，10%福尔马林，FAA固定液
固醇类
10%福尔马林，Bouin液
补体
95%乙醇，100%***，10%福尔马林，Bouin液
肿瘤胚胎抗原
10%福尔马林，
（四）注意事项
免疫组化固定方法的原则是：在保持细胞形态完好和所测抗原 的前提下，应采用浓度最低的固定液和最短的固定时间。为此，固定 组织时应该：
组织新鲜，尽早、尽快固定。
组织块尽量小（＜）。
固定液体积大于组织体积20倍以上。
4・固定后充分水洗，减少固定液造成的人为假象
5・针对抗原、染色法选择最佳固定方法。
固定的和未经固定的组织、细胞以及各种涂片和切片方法均可 用于免疫组化，但其效果不同。
（一）冰冻切片
优点：是能较好地保持抗原活性（尤其是表面抗原）和酶。冰冻切 片简便快速，省去固定、包埋和切片处理等一系列繁琐步骤。
缺点:是不能用于回顾性研究，不利于常规检查和长期保存标本， 不如石蜡切片清晰。常用致冷切片和恒冷箱切片机（Cryostat），以后
者最佳，可制成4-6 um的薄片。组织切片可直接贴附于玻璃载片， 或贴附于涂有明胶或histostik（W品粘附剂）的玻璃片上，以减少组织 片脱落。
为防止冷冻过程中冰晶形成，破坏组织结构和保持抗原，取材后 立即将标本浸入深低温预冷的（干冰容器内，一70度）正已烷液内骤冷 30-60秒，取出后再冰冻切片。切片最好尽快进行组化染色亦可吹干 储存于片盒内，外包塑料袋，置于一20度低温冰箱，一个月内使用。 染色前，从冰箱内取出切片，置室温干燥10分钟，再经***固定5-10 分（未固定者），即可进入染色程序。
（冰冻切片OCT包埋，置液氮液面上10-20秒，低温保存。）
（二） 石蜡切片
一般厚约3-5 um，切片于37度烘烤过夜，可置4度保存。切片 前，固定的组织块需经酒精逐级脱水，二甲苯透明，再浸蜡包埋。各 步骤时间均不宜过长（1-2小时），以免组织变脆。
（石蜡切片①脱水、透明在4 0C进行。②浸蜡、包埋时石蜡温 度低于60 0C。）
（三） 振动切片
可把新鲜组织（不固定不冷冻，或低浓度固定液稍稍固定）切成 20~100pm厚，漂浮免疫组化染色，检出阳性部位，后固定，常规电 镜样品制备。适于免疫电镜细胞化学观察。
（四） 塑料包埋切片
优点是组织块可同时用于光镜切片、半薄切片（-）和
电镜超薄切片。目前常用包埋塑料有两大类：***丙烯酸盐类和环氧 树脂类。前者能较好地保存抗原，染色前不必脱去包埋材料，但切片 易皱折。
（五）超薄切片 载玻片及盖玻片的处理和切片的附贴
载玻片及盖玻片的处理
载玻片：清洗液（酸）浸泡12-24小时，水洗，95%酒精 浸泡2小时后擦干或烤干。
盖玻片：清洗液浸泡2小时，或盐酸酒精浸泡后水洗，95% 酒精浸泡，擦干。
切片的附贴
免疫组化染色过程较长，并需用含表面活性剂的缓冲液多次浸泡 切片。有的石蜡切片染色前要用蛋白酶消化。新鲜组织如用灌注法或 浸润法固定后再作冰冻切片会失去粘附性。以上这些因素常常造成染 色过程中切片的脱落。要防止这一问题的发生，常规的蛋白甘油附贴 法已不符合要求。
免疫组化染色中可选用的附贴剂。
（1）甘油一明胶:
1% 明胶 100ml 甘油 12ml 麝香草酚 数滴
混匀，涂布载破片上，切片附贴后置多聚甲醛蒸气（80度） 中1小时
⑵甲
1%明胶 5ml涂布载片上，切片附贴后置