文档介绍：关于实验五大肠杆菌与沙门氏菌
第1页，讲稿共28张，创作于星期日
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；
记录结果。
第11页，讲稿共28张，创作于星期日
三糖铁琼脂接种
挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；
置 37℃培养。
第12页，讲稿共28张，创作于星期日
生化管接种培养
糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
H2S试验；
尿素酶试验；
枸橼酸盐利用试验。
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
第13页，讲稿共28张，创作于星期日
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌
沙门氏菌
置 37℃培养
第14页，讲稿共28张，创作于星期日
吲哚试验
接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d；
静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL；
上层变为红色者为阳性反应。
***
混匀
分层
吲哚试剂
阳性
阴性
第15页，讲稿共28张，创作于星期日
吲哚试验原理
蛋白质中的色氨酸
有些细菌
如大肠埃希氏菌
吲哚
对位二***氨基
苯甲醛
+
玫瑰吲哚
红色
① 试剂配方一：
对二***氨基苯甲醛 1g
无水乙醇 95mL
浓盐酸 20mL
② 试剂配方二：
对二***氨基苯甲醛 5g
戊醇（或异戊醇） 75mL
浓盐酸 25mL
先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。
第16页，讲稿共28张，创作于星期日

接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）；
于培养物中加入几滴试剂；
变红色者为阳性反应，
桔红到黄色则为阴性。

阳性
阴性
第17页，讲稿共28张，创作于星期日
V-P试验
接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）；
V-P甲液；
随后加V-，轻摇；
静置10-15min。
15min内变红者为阳性。
V-P甲液
V-P乙液
阳性
阴性
第18页，讲稿共28张，创作于星期日
-P试验原理
：
***红是一种pH指示剂：
当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；
在加入***红指示剂后显红色为阳性。
pH -
红 → 黄
葡萄糖
***酸
乙酰***甲醇
2,3-丁二烯醇
某些细菌能发酵
二乙酰
碱
V-P试验：
+
胨中的胍基化合物
注意：-P试验是密切相关：
，则V-P是阴性；或者相反。
粉红色化合物
+
第19页，讲稿共28张，创作于星期日

V-P试剂
***红
95％酒精 60mL
蒸馏水 40mL
甲液：α萘酚酒精溶液
（α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液
（KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
第20页，讲稿共28张，创作于星期日
五、结果观察
大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；
麦康凯：琼脂上形成红色菌落较大的菌落。
第21页，讲稿共28张，创作于星期日
三糖铁琼脂
斜面
产酸（黄色）
底部
产酸（黄色）
产气
＋
H2S
－
反应模式表示：
A／A
＋；－
第22页，讲稿共28张，创作于星期日
沙门氏菌的生长表现
普通琼脂：生长不良；
麦康凯：琼脂上形成灰白色菌落。
第23页，讲稿共28张，创作于星期日
三糖铁琼脂
斜面
产碱（红色）
底部
产酸（黄色）
产气
－
H2S
＋
反应模式表示：
K／A
＋(－) ；＋(－)
第24页，讲稿共28张，创作于星期日
细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，-×2-3μm，
无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
第25页，讲稿共28张，创作于星期日
生化管接种培养
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
葡乳麦甘蔗 H2S 尿枸
大肠杆菌
沙门氏菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/-