文档介绍：实验六血清ALT活性测定
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一、何谓ALT？
谷丙转氨酶
（glutamic pyruvic transaminase，GPT）
丙氨酸氨基转移酶
（alanine aminotransferase，AL实验六血清ALT活性测定
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一、何谓ALT？
谷丙转氨酶
（glutamic pyruvic transaminase，GPT）
丙氨酸氨基转移酶
（alanine aminotransferase，ALT）
复****br/>精选ppt
反应式
大多数氨基酸可参与转氨基作用，但赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。
二、ALT催化的化学反应:
丙氨酸 +α-***戊二酸 ***酸 + 谷氨酸
ALT
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三、ALT的分布:
主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等，血清中的含量很低。
病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。
四、ALT测定的临床意义：
作为（肝脏）疾病诊断和预后判断的指标之一。
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五、测定血清ALT的方法：
King法（金氏法）
Reitman法（赖氏法）
Mohun法（穆氏法）
1981年全国生化检验方法学讨论会确定用赖氏法（改良）作为临床首选，单位为：卡门氏单位。
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实验六血清ALT活性测定 ---改良赖氏法
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一、实验性质：分析性
二、目的及要求
1、掌握ALT测定的原理及临床意义
2、熟****测定的操作方法。
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丙氨酸 +α-***戊二酸 ***酸 + 谷氨酸
ALT（血清）
基质液
在一定反应条件下 ( ，37℃ ) , 作用 30 min：
三、原理：
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α-***戊二酸
***酸
+ 2,4 二硝基苯肼
α-***戊二酸-2,4二硝基苯腙
***酸-2,4 二硝基苯腙
两者在碱性条件下呈红棕色，等摩尔浓度条件下，***酸 OD 值大 a-***戊二酸 3倍。
四、试剂：省略
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2、按下表操作：
加入物（ml）对照管 (B) 测定管 (U)
血清
基质缓冲液 —
混匀，37℃水浴30min（准确记时）
2,4—二硝基苯肼溶液
基质缓冲液 —
混匀，37℃水浴20min；
M NaOH ml，室温放置10 min；
在波长505 nm 处，以蒸馏水校正零点，读取各管吸光
度；根据 (AU--AB) 标准曲线，得到酶活性的卡门氏单位数。
1、将基质缓冲液和血清在 37℃ 水浴箱
预温5min。
五、操作步骤：
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3、标准曲线的绘制：
管号 0 1 2 3 4
磷酸盐缓冲液（ml）
***酸标准液（ml） —
基质缓冲液（ml）
相当于酶活性（卡门氏单位） — 28 57 97 150
各管加 2,4- ml，混匀，37℃水浴 20min；
各管加 mol/L ml，混匀，室温放置10min。
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波长505 nm处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度；
各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性单位作图即成标准曲