文档介绍：脑脊液检验
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2021/7/19 星期一
实验一脑脊液理学检查
（目的）掌握脑脊液理学检查的内容，方法。
（标本）新鲜脑脊液。
（操作）
1．观察颜色肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色，乳白色，红色脑脊液）
除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴，混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。
充池：
计数：
计算：
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稀释计数法（浑浊脑脊液）
稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。
充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液充入1个计数池。
计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格内的白细胞数。
计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数
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白细胞分类计数
直接分类法白细胞计数后，转换高倍镜，根据细胞的形态和细胞核形态进行直接分类，共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂片染色分类计数
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涂片染色分类法若直接分类不易区别细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min，取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后，油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细胞分类计数报告方式相同。若见激活型单核细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞（形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中
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（注意事项）
直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再充池计数。
细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。
血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值
白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细胞数
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细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。
涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏或HE染色查找肿瘤细胞。
实验结束后，％（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免损坏计数板。
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方法学评价
脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手工显微镜法。白细胞直接分类法简单，快速，但属粗略分类，其准确性差，且细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧性标本的细胞变形，分类更困难，误差较大。涂片染色分类法分类详细，结果准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如肿瘤细胞。该法被推荐使用，但其操作较复杂，费时。
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血液分析仪也可进行脑脊液细胞计数和白细胞分类，此法简单，快速，但标本尤其是病理性，陈旧性标本中的组织，细胞的碎片以及细胞变形等都可以影响细胞分类和计数，故结果重复性，可靠性有待进一步探讨。另外，蛋白质含量高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪器堵孔，故不推荐使用
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质量控制
标本采集后应在1h内进行细胞计数，若放置太久，细胞可能凝集成团或破坏，影响计数结果。标本必须混匀方可充池，否则影响计数结果
因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白细胞计数结果必须校正，以剔除因出血而带来的白细胞。
细胞计数时应注意新型隐球菌与白细胞，红细胞区别
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白细胞计数直接法的试管或吸管中的冰乙酸要尽量去尽，否则结果偏低。
若标本陈旧，细胞变形时，白细胞直接分类法误差大，推荐用涂片染色分类法分类计数。
涂片染色分类计数时，离心速度不能太快，否则细胞形态受影响，有条件的单位可用玻片离心沉淀法，细胞室沉淀法等收集细胞。
涂片固定时间不能太长，更不能高温固定，以免细胞皱缩。
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参考值
①脑脊液细胞总数：***（0~10）×106/L,儿童（0~15）×106/L.
②无红细胞，仅有少数白细胞，以单个核细胞为主，几乎完全为淋巴细胞，偶尔内皮细胞。
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