文档介绍：关于核苷酸和核酸
第1页，讲稿共33张，创作于星期二
一、核酸的化学反应
（脱氨，deamination）
次黄嘌呤
5-甲基胞嘧啶
黄嘌呤
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一、核酸的化学反应
（脱氨，deamination）
次黄嘌呤
5-甲基胞嘧啶
黄嘌呤
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——脱嘌呤
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、烷化剂对DNA的损伤
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亚硝酸
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烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）
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紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体
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第8页，讲稿共33张，创作于星期二
第9页，讲稿共33张，创作于星期二
溴乙啶
丫啶橙
放线菌素D
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二、DNA的酶法甲基化（methylation）
甲基供体： S—腺苷甲硫氨酸
甲基受体：被修饰碱基（A、C多于G、T）
碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是可逆的。
甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA和外来DNA；调节基因表达；帮助DNA修复等。
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第八节 核酸酶和DNA限制性内切酶
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一、核酸酶（nuclease）
能水解核酸的酶为核酸酶
核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）
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核酸酶的分类
按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖核酸酶(DNase)
按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶
内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片段。
外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：3’-核酸酶和5’-核酸酶
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核酸酶对其底物的作用具有特异性
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二、限制性内切酶（restriction endonuclease）
限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物体内，用于“防御”外来DNA的入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受损害（甲基化作用） 。
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1. 限制性内切酶的分类
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
基因工程技术中常用Ⅱ型
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不需要ATP参加；
不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。
专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列一般含4—6 个核苷酸残基，并具回文结构“落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂” 。
2. II型限制性内切酶
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Ⅱ类酶识别序列特点
回文结构palindrome
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切口（kerf）：粘端，平端
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（约1000多种）
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Hin dⅢ
属 系 株 序
Haemophilus influenzae d株
流感嗜血杆菌d株的第三种酶
命名naming
第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写；
第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写；
第四个字母代表株（strain）；
用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。
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第27页，讲稿共33张，创作于星期二
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三、限制片段的长度和限制图
1. 限制片段的长度
识别4个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均长度：256（44）
识别6个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均长度：4096（46）
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限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或DNA片段上的排列，由于各酶切点之