文档介绍：中药材中蛋白质含量测定方法的研究
张善玉 葛 娜 近年来,随着基因工程学、分子生物学和现代分离技术的快速发展,蛋白质也成了一项质量和资源评价的指标,故探索测定蛋白质含量的方法有着重要的意义[1]。目前测定蛋白质含量的常用方法有凯液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,这种紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定各种蛋白质含量[11]。汪良驹等[5]探讨了用此法测定银杏叶片可溶性蛋白质含量,结果表明双脲试剂与银杏叶片可溶性蛋白质反应迅速、稳定,适合于这种果树叶片可溶性蛋白质测定。应用双缩脲法测定决明子中蛋白质含量结果表明,决明子中蛋白质含量较高 [12]。
4 Folin酚试剂法
Folin酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高(比双缩脲法灵敏得多),缺点是费时间较长[13],要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。康东周[14]等认为用 Lowry 法测定蛋白质含量时,酚类、单糖类等干扰测定,因此需先经过蛋白沉淀的处理过程,排除干扰物质的影响。吴瑾瑾 [15]等采用Folin酚试剂法测定了康克胶囊中可溶性蛋白质的含量,结果蛋白质在25~300 μg/ml范围内呈良好的线性关系,r≥,方法灵敏、准确、重复性好。利用此法测定灵芝产品中多糖肽的含量,结论是本法稳定可靠、简便快速,可作为灵芝及其产品质量控制指标[16]。
5 紫外分光光度法
蛋白质分子中,一些氨基酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质在280 nm处有吸收,其光密度值与蛋白质含量成正比,可用于蛋白质含量的测定[11]。本方法定量过程中无试剂加入,蛋白可回收,且方法简便[17]。曹艳等[18]用紫外吸收法测定了半夏总蛋白含量,结论是由于不同样品中干扰成分差异较大,致使280 nm紫外吸收法的准确性稍差。故本实验只适用于总蛋白的含量测定。因此,就含有大量复杂成分的中药材中蛋白质含量测定而言,最好是先进行蛋白纯化后在用紫外分光光度法测定。
6 其他方法
随着蛋白质组学研究技术的深入发展,蛋白质组学在基础研究、农业、医药学研究中得到广泛的利用,近年来也应用于中药材鉴别和蛋白质的半定量。如在二维电泳基础上的染色方法进行蛋白质的定量是应用较多的方法之一。唐任能[19]等采用SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳和BCA蛋白含量测定法比较了鹿茸、鹿托盘、鹿骨水溶性总蛋白差异。结论是SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳法及BCA蛋白含量测定法是鉴别鹿茸、鹿托盘及鹿骨有效方法。另外,利用凯氏定氮法对板蓝根、南板蓝根和大青叶的生药和相应的新鲜植物组织中的总蛋白含量进行测定,提取液中的蛋白质组分应用SDS2PAGE电泳进行分析,证实了三种药材的蛋白质种类和含量有一定差别,且同种药材的新鲜植物组织和生药蛋白质组分在含量和种类上有明显差别[20]。
7 结束语
总之,虽然蛋白质含量的测定方法很多,但是,还没有一个完美的测定中药材中蛋白质含量的方法。在选择方法时应考虑实验对测定所要求的灵敏度和精确度;中药材中蛋白质的性质;中