文档介绍：紫外-可见分光光度法
(1) σ-σ* 跃迁：能级大，△E大，λmax小， σ-σ*的 λmax <150nm，远紫外吸收。
（2） п-п*跃迁： △E 小
a 单个п键， λmax =200nm，末端吸收
b
同分异构体：
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：除了影响吸收峰（λ）位置外，还影响吸收强度（ε）和光谱形状。
溶剂极性对异丙叉***的两种跃迁吸收峰的影响
跃迁类型 正已烷 ***仿 甲醇 水 迁移
п-п* 230 238 237 243 长移
n-п* 329 315 309 305 短移
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：主要是对弱酸弱碱性物质的影响。
非极性溶剂
极性溶剂
非极性溶剂
极性溶剂
跃迁
п*
n
跃迁
п*
п
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§2 基本原理－吸光的定量关系
I0
b
I
T＝I/I0
百分透光率T％＝I/I0× 100％
：b
：C（mol/l，％）
：A＝－logT=lg(I0/I)
I0、I、C、b、T、A量的关系
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-Beer定律
Lambert定律：C一定，A＝-logT=K1b
Beer定律：b一定，A＝-logT=K2c
两定律合并：A＝a·b·c a=K1K2 a为吸收系数
注：吸光度A是指某一波长（λ）下的吸光强度即入射光为单色光
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吸收系数：
摩尔吸收系数(ε)：在一定条件下，当C＝1mol/l，b=1cm时的吸光度。
百分吸收系数（E 1cm 1% ）：一定条件下，当C＝1％，b=1cm时的吸光度。
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特征：1）ε、E均为特征常数
2）ε、E是有条件的，同一物质，不同条件下所测值不同（波长不同、溶剂不同、温度不同等）。
3）ε、E越大，测定吸光度灵敏度越高。
4）ε=104-105为强吸收，103-104为中吸收，<103为弱吸收。
5） 用于定性判断，K带吸收大，ε、E 大，R带的ε、E小。
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例：紫草素（C16H6O5 ），，b=1cm，λmax =516nm，A=、E
注：若溶液中存在多种吸光物质时，吸光度将是各组分吸光度的总和。
A总＝Aa+Ab+Ac+……
＝ εadCa+ εbdCb+ εcdCc+……
I0
a、b、c
I
d
注：每种物质的吸收度仅由本身的性质和C决定，与其它物质无关。
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吸光度A具有加和性，对同一物质来说
浓度（C）
吸光度（A）
0
0
1C
A
2C
2A
3C
3A
4C
4A
工作曲线
C
A
负偏离
正偏离
线性范围：线性范围越大越好。
C1
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三、偏离Beer定律的因素
1)化学因素：离解、缔合、配位等化学变化，使吸光物质形态发生变化。溶剂、pH、温度等影响。
A＝a·b·c
影响吸收系数a的因素有：
1、物质的性质
2、波长的不同
3、其它因素 如溶剂的影响等
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ε ×104
亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱
a
b
c
(a)×10-6mol/l
(b)×10-4mol/l
(c)×10-3mol/l
C
A
负偏离
610nm
660nm
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2、光学因素
（1）单色光的纯度
Λ2 λ1
A
λ
A
λ
Beer定律前题：入射光是单色光。
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单色光
I0
I
单色器
复合光
狭缝
I0
比色池
760nm
400nm
可见光
I
I/2
谱带宽度: 狭缝具有一定宽度，使分离出的光同时包含了所需波长的光和附近波长的光。常用半峰宽来表示。
单色光的谱带宽s=λ2-λ1
1 2
λ
510-520
透光强度
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谱带宽度的值愈小，单***愈好。但因仍是复合光，故仍可以使吸光度变小而偏离Beer定律。
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（2）杂散光:与所需波长相隔较远的光。
Io
Is
I
Is
<
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（4）非平行光
（3）散射、反射
克服方法：
比色池：擦干净
溶液：溶液均一，透明；用空白作参比。
克服方法：比色池位置放正确，与光路垂直。
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