文档介绍：3
DNA 琼脂糖凝胶电泳
跑胶即走电泳，是 DNA 和 protein 最根本的定性定量方法。一般是琼脂糖胶或 胶，琼脂糖胶一般是检测DNA 的，可以检验一下你到底提到dna 没过确定你提 dna 分子量的大小： 胶一般是检，可以嵌入核酸的双链碱基对之间，在紫外光线的激发下，发出红色荧光。
2、银染法：染色液中的银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用复原剂如甲醛使银离子复原成银颗粒，可以将核酸带染成黑色。灵敏度比 EB 高，但是DNA 不易回收。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：
制备 1%琼脂糖凝胶(大胶用 70ml,小胶用 50ml):称取 g( g)琼脂糖置于锥形瓶中,参加 70 ml(50ml)1×TAE, 3 次至琼脂糖全部溶化,摇匀,即成 %琼脂糖凝胶液.
胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干, ,, 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀留神地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢开放,直到整个玻璃板外表形成均匀胶层 .室温下静置直至凝胶完全凝固 ,垂直轻拔梳子,取下胶带,
1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止.
加样:在点样板或 parafilm 上混合 DNA 样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于 10 ul 微量移液器分别将样品参加胶板的样品小
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槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔四周的凝胶面.(留意:加样前要先登记加样的挨次).
4. 电泳:加样后的凝胶板马上通电进展电泳,电压 60-100V,样品由负极(黑色) 向正极(红色),琼脂糖凝胶的有效分别范围降低 .当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时,停顿电泳.
(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有 ug/ml 的溴化乙锭 1×TAE 溶液染色约
20 min,再用清水漂洗 10 min.
(6)观看照相:在紫外灯下观看,DNA 存在则显示出红色荧光条带,承受凝胶成像系统拍照保存.
琼脂糖凝胶电泳
一,试验原理
琼脂糖凝胶电泳是分别和纯化DNA 样品参加到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中, DNA 分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基,,DNA DNA 片段泳动速度不一样,因而可依据 DNA DNA, 也可以分别相对分子质量一样,而构型不同的 DNA DNA (ethidium bromide, EB),其分子可插入 DNA 的碱基之间,形成一种络合物,在 254～365nm 波长紫外光照耀下,呈桔红色荧光,因此也可对分别的 DNA 进展检测.
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在 ～50kb 范围内的 DNA DNA 片段分别中的应用方法.
琼脂糖凝胶浓度〔%〕
线状 DNA 分子分别范围〔kb〕
5--60
1--20
--7
--6
--3
--2
3
琼脂糖凝胶电泳是用于分别纯化和鉴定核酸的方法，依据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点琼脂糖的熔点为 62--65,溶解后在 37 下维持液体状态约数小时,主要用于 DNA 片断的回收、质粒与外源性 DNA 的快速连接等。
DNA 在琼脂糖凝胶中的迁移速度与琼脂糖浓度、DNA 分子量及其构象、电泳缓冲液、电场强度等因素有关，一般说来，DNA 片断越大或者琼脂糖浓度越大，其迁移速率越大；而电场强度越高，其迁移速率越大。不同浓度琼脂糖凝胶 DNA 分别范围见上图表。
二,:
水平电泳槽,电泳仪,凝胶成像分析系统,微波炉,微量移液器,透亮胶带,点样或parafilm,100 ml 或 250 ml 锥形瓶,量筒,吸头等.
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50×TAE 缓冲液的配制