文档介绍：血清丙氨酸氨基转移酶测定
转移酶(transferases)
催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物的酶。
反应代表式为:
AB+C A+BC
B为被转移的基团,如氨基(—NH2)等
转氨酶(transaminase)
又称氨基转移酶。
大多数转氨酶是催化α-氨基酸的氨基转移到α-***酸的***基上,产生另一种α-***酸和α-氨基酸。
血清丙氨酸氨基转移酶测定(alanine aminotransferase, ALT)
测定方法:
定时比色法(两点法)
酶联-紫外连续监测法(动力学法或速率法)
酶联-紫外连续监测法
原理:
L-丙氨酸+α-***戊二酸***酸+L-谷氨酸
***酸+NADH L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量,从而计算出ALT的活力。
ALT
LD
方法学评价:
血清中也含有***酸及LDH,可以消耗NADH而使测定结果偏高。
对策:采用过量的NADH(~),将血清同不含α-***戊二酸的所有试剂一起预温,使其他副反应充分进行,再加入α-***戊二酸以启动酶反应,监测光吸收的变化,可完全排除这种干扰。
定时比色法
国内采用的比色测定法有三种:
赖氏法(30min)
金氏法(60min)
改良穆氏法(30min)
三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度
都相似,单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
国内较多采用赖氏法,其优点为:
标准曲线中两种***酸的量客观地反映了酶作用的实际情况;
标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力的大小;
测定结果可以直接与分光光度法相比较。
赖氏法原理:
***酸和α-***戊二酸在血清ALT的作用下生成***酸和谷氨酸,在酶反应到达规定时间内,加入溶于酸的2,4-二硝基苯肼终止酶反应,并分别与产物***酸和剩余底物α-***戊二酸生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下均呈红棕色,二者吸收光谱在505nm处差异最大,***酸苯腙的呈色强度约为α-***戊二酸苯腙的3倍,据此可算出***酸的生成量,推算出ALT的酶活力。
临床意义
ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。
1、急性病毒性肝炎,可观察病情发展,作预后
判断。
2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝,正常或轻度增高。
3、肝硬化、肝癌时,ALT轻度或中度增高,提
示可能并发肝细胞坏死。
4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多
发性肌炎等亦可引起ALT增高。