文档介绍：关于血凝及血凝抑制实验
第1页，讲稿共24张，创作于星期三
实验目的
１血凝试验：滴定病毒的血凝效价(病毒的凝集价)，采用一定的病毒量，通常采用4个血凝单位。
２血凝抑制试验：
应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用原理
血凝抑制原理
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血凝抑制试验原理
病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，即抗体与病毒结合后，血凝素无法吸附于红细胞表面的受体上，用免疫血清阻止红细胞凝集的现象，称为血凝抑制．
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实验材料
器材：U型或V型微量反应板、微量移液器、枪头
试剂：1%鸡红细胞、NDIV血凝素、NDIV抗血清、生理盐水
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实验步骤
，在第1排1-10孔内加入25ul生理盐水，第11孔不加。第12孔加25ul生理盐水
，混匀后吸出25ul加入第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。
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-12孔均加入25ul的生理盐水。
%的鸡红细胞悬液，震荡，室温静止感作15-30min，每5min观察一次结果。
，稀释使成为四价备用．
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血凝试验结果判定
效价判定：
凝集特别显著：“＋＋＋＋”
凝集现象次之：“＋＋＋”
凝集清楚可见：“＋＋”
稍显凝集者：“＋”
血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。
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结果判定
，按下列标准判定
血凝反应强度示意图
“4＋” 红细胞呈片状凝集，均匀布满孔底，边缘有时不整齐或皱缩。
“3＋” 红细胞呈片状凝集，但面积略小于“4+”。
“2＋” 红细胞呈片状凝集，但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。
“＋” 红细胞大部分沉于孔底中央，周围有少量散在凝集颗粒。
“－” 红细胞均沉于孔底呈小圆点状，边缘整齐。
，红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集价。
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血凝抑制
，在第1排1-10孔内加入25ul生理盐水，第11孔不加。第12孔加25ul生理盐水。
，混匀后吸出25ul加入第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。
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-12孔内均加入“四价”血凝素25ul，震荡后，室温静止作用5min。
-12 孔内均加入1%的鸡红细胞悬液25ul，震荡，室温感作15-30min，每5min观察一次结果。
，记录实验数据．
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血凝抑制试验结果判定
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集 （-）
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血清稀释度。
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思考题
1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应？为什么？
2、血凝抑制实验是不是特异的抗原抗体反应? 为什么？
3、血凝试验中为什么要加补充液？
4、为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？
5、血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？
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孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11(+)
12（-)
HA
稀释度
2
4
8
16
32
64
128
256
、、
、、
弃
生理盐
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
x
25
血凝素
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25血凝素
x
生理盐水
25
25
25
25
25
25