文档介绍：抗蛇毒血清的制备
摘要：目的对传统抗蛇毒血清精制方法进行改进,研制出一种高收率、高纯度、低成本、易于保存与使用
的新型抗蛇毒血清的制备方法。方法先提取抗蛇毒血清的IgG后酶解分段盐析得F(ab,)2片段，通过疏水层析进一步纯化尸(ab,~015mg)于马背部注射2针,每针间隔3周。(3)超免疫。基础免疫后第2周测定马的血清效价,当有明显抗体应答反应后进行超免疫,超免疫剂量从每匹马1mg分5~10次加大到10mg,每次免疫间隔2周，免疫部位为皮下和肌肉、穴位交替进行。
1．,于37°C结合45min后接种小白鼠，雌雄各半,ip,每个稀释度注射4只，记录72h小鼠死亡情况，以能保护小鼠全部存活的一组作为其试血效价。1mL免疫血浆能中和1mg眼镜王蛇毒后，采血，离心分离血浆，保存于一20C,累积几次血浆后，混合并制备
(1)IgG提取。每100ml血浆磁力搅拌下加入固体硫酸铵，使硫酸铵终浓度为50%，搅拌30min后离心，取沉淀，加入原血浆体积的注射用水，搅拌至溶解，加入固体硫酸铵，使硫酸铵终浓度为33%，搅拌至固体硫酸铵完全溶解后离心，取沉淀，沉淀加注射用水适量，搅拌至完全溶解、透析后离心，取上清即为IgG溶液［5］。
(2)F(ab)2制备。上述IgG溶液按0111g/1000ml(原血浆体积)加入胃酶，6mol/,~6h,5mol/,,待温度降至45。C以下后，离心，上清为F(ab,)2。(3)F(ab,)2纯化。上述F(ab,)2用硫酸铵调节电导后上Pheny-lSepharose(low-sub)柱,用112mol/L(NH^SOq+50mmol/L磷酸钠缓冲液()淋洗后，用注射用水梯度洗脱，分别收集各洗脱峰，并测定其F(abc)2纯度。(4)抗血清效价测定。参照精制抗蛇毒血清制备及检定规程［6］。(5)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及分子量测定。电泳方法参照分子克隆实验指南【7】.蛋白纯度用Bio一RadGeldocEQ凝胶成像系统对电泳结果进行图像采集后，。
，由SDSPAGE电泳图(图1)可看出，IgG收率较高,
基本没丢失，IgG的纯度在85%左右。
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图1IgG各步提取结果
97400
66200
43000
31000
1．原血浆;%(NH)SO上清;%(NH)SO沉淀;%(NH)SO上清;5.
42442442433%(NH)SO沉淀;;。
424
(abc)2制备结果由SDS-PAGE电泳可看出，胃酶消化5h左右IgG已基本完全切开,57°C加热30min后，大部分的pFcc片段去除干净，此时的F(ab,)2纯度可达到60%左右(图2)。
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igG
F(砌2
97400
66200
43000
31000
图2F(abc)2各步纯化图谱
;;;;；6.