文档介绍：第六章目的基因导入受体细胞
第三节重组子的筛选
在重组DNA分子的转化、转染或转导过程中,一般仅有少数受体细胞成为克隆子。必须采用合适的方法从大量的细胞背景中筛选出期待的克隆子。
概念
克隆子
转化子
重组子
将摄取外源DNA分子并能使该分子在其中稳定维持的受体细胞统称为克隆子。
把采用各种转化方法或转导方法获得的克隆子叫做转化子(导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子),现在这两者有通用的趋向。
含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子,如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子。
经过各种方法将外源DNA分子导入受体细胞后,获得所需阳性克隆子的过程称为克隆子的筛选。
一、遗传表型直接筛选法
(一)根据载体选择标记初步筛选转化子
在构建基因工程载体系统时,通常在载体DNA分子中组装了一种或两种选择标记基因,在受体细胞内进行表达,呈现出特殊的表型或遗传学特性,作为筛选转化子的依据。
一般的做法是:
将转化处理后的受体细胞接种在含适量选择药物的培养基上,在最适生长温度条件下培养一定时间,根据菌落生长情况挑选出转化子。
常用的选择标记基因主要是:
抗性基因;
表达产物可以发光或使反应底物显色的基因
相应的选择条件是:
可以被抗性基因产物分解的抗生素;
可以使基因产物发光的光线,或者是可以使基因产物显色的试剂。
选择培养基是:
根据宿主细胞类型配置的培养基,对于细菌受体细胞而言,通常用LB培养基,在LB培养基中加入适量的某种选择物,即为选择培养基。
选择物:
是由载体DNA分子上携带的选择标记基因所决定。
(一)根据载体选择标记初步筛选转化子
(1)抗药性筛选
(2)插入失活筛选法
(3)插入表达筛选法
(4)显色互补筛选法
(5)利用报告基因筛选植物转化细胞
(6)利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞
(1)抗药性筛选