文档介绍：实验二微生物的分离纯化
划线接种注意要点
划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5.
划线为连续实验二微生物的分离纯化
划线接种注意要点
划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5.
划线为连续划线,.
每次划完后接种环应灭菌.
稀释分离涂布平板
稀释分离倾注平板
厌氧微生物的分离
厌氧罐
厌氧手套箱
厌氧罐
厌氧手套箱
细菌的分离
1、一般采用NA培养基，加入抗真菌剂(如放线菌***和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1，以抑制真菌的生长。
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。
放线菌分离培养需考虑的生态参数：
温度、pH、离子强度、氧化还原电势和底物浓度。
一般采用高氏1号培养基，大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌落。
选择性地添加抗生素，通常加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌***，以抑制真菌的繁殖。
放线菌的分离
真菌分离
利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。
一般采用PDA培养基
改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。
有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。
（2）纯化
将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上
颜色反应：分离特定的菌株；
牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；
待分离的微生物的生长特征明显不同
液体培养基分离纯培养
稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。
单细胞（孢子）分离
一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比；
（3）形态观察
菌落（colony）：
单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体
众多菌落连成一片
菌苔（lawn）
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般
都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微
生物进行分类、鉴定的重要依据。
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
最常见的保藏方法：斜面
细菌的保藏：甘油保藏
真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌连续在培养基上（内）移种
种生活态传代培养保藏法连续在活宿主上（内）移种
保固体斜面
藏湿法半固体琼脂柱
方休眠态液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）
法干法藏在玻璃管内
吸附在合适的载体上
菌种保藏的方法
方法：①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代原理：低温下，微生物代谢强度明显下降。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。③干燥保藏法将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。
④真空冷冻干燥法
加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。
适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。
⑤液氮超低温保藏法
将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。
适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
主要措施
适宜菌种
保藏期
评价
冰箱保藏法（斜面）
冰箱保藏法（半固体）
石蜡油封藏