文档介绍：NBT法测定超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)活力 植物组织中丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量的测定
整理课件
Planta, 2002, 215: 1022
缓冲液 缓冲液
NBT溶液 NBT溶液 NBT溶液 NBT溶液
3. 测定 混匀后将2支试管（不加酶液而用缓冲液，为最大还原管）设为对照，其中1支对照管置于暗处，其它3支置4000Lux光C2023（或阳光）下反应20min（显蓝色），反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定2支试管的OD560
整理课件
SOD活性计算
SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。
(Ack－AE)×V
Ack××W×Vt
Ack照光对照管的吸光度
AE样品管的吸光度
V样品液总体积（ml）
Vt测定时样品用量（ml）
W样鲜重（g）
SOD总活性(U/g)＝
整理课件
Planta, 2002, 215: 1022
整理课件
植物组织中MDA含量的测定
实验目的
了解胁迫反应的具体机制（膜脂过氧化 & 抗氧化）
掌握膜脂过氧化作用产物MDA含量的测定方法
整理课件
实验原理
测定植物体内MDA含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的MDA产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三***恶唑2、4－二***），该物质在532nm波长下有最大吸收峰。
测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。因此测定植物组织中MDA与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
在MDA含量测定时，同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
整理课件
双组分分光光度计法计算MDA
据朗伯一比尔定律：D＝kCL，当液层厚度为1cm时，D=kC， k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质时，某一波长下的消光度值等于此混合液在该波长下各显色物质的消光度之和。
、 。
MDA与TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0，532nm波长下的比吸系数为155， 600nm波长处有最小光吸收
532nm非特异性吸光值可以600nm波长处的吸光值代表。
根据双组分分光度计法建立方程组，A450=（×10－3）·C1
（A532－A600）=（155×10－3）·C2+（×10－3）·C1
求解方程得式中
C1＝11．71D450
C2＝(D532-D600)--
C1--可溶性糖的浓度(mmol·L-1)
C2----MDA的浓度（·umol·L-1）
D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
整理课件
材料、仪器设备及试剂
（一）材料:小麦叶片
（二）仪器设备：；；
样器；4. 试管数支。
（三）试剂:
5％三***乙酸(TCA)溶液
％硫代巴比妥酸TBA溶液
整理课件
实验步骤
1. 丙二醛的提取:
，加入少量石英砂和5％三***乙酸5ml，研磨至匀浆，3000 rpm离心10min，其上清液为MDA提取液。
2. 显色反应及测定
取MDA上清液2ml，然后再加入2ml ％TBA。摇匀，混合液在沸水浴中反应30 min，冷却后再3000 rpm离心