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抗癌活性肽对大肠癌LOVO细胞及相关凋亡基因的影响
学 科 专 业：外科学
导 师 姓 名：王茂春 教授
指 导 教 师: 苏秀兰 教授
研 究 生 姓 名：白斯古楞
整理课件细胞p53、bcl-2、Bcl-xl基因表达的影响。
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RT反应液配置
试剂 使用量 5×PrimeScript®Buffer 4 μl PrimeScript®RT Enzyme Mix I 1 μl Oligo dT Primer（50 μM） 1 μl Total RNA 根据浓度计算体积RNase Free dH2O up to 20 μl
注：Total RNA用量为1ug 。
反转录反应条件如下:
37℃ 15 min *3（反转录反应）
85℃ 5 sec（反转录酶的失活反应）
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PCR反应液配制（15ul）
试剂 使用量
5×PrimeSTAR®Buffer（Mg2+ plus） μl dNTP Mixture（ mM） μl Primer 1（10 μM） μl Primer 2（10 μM） μl cDNA产物（10 pg/μl） μl PrimeSTAR®HS DNA Polymerase μl 灭菌蒸馏水 up to μl
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PCR引物详细序列
Sequence(5'to3') Product(bp) Tm p53 F ATGAAGCTCCCAGAATGCCA 264 52℃ p53 R AATCAACCCACAGCTGCACA 264 52℃ Bcl-xl F CCTGCCTGCCTTTGCCTAA 244 53℃ Bcl-xl R TAAACTGACTCCAGCTGTATC 244 53℃ bcl-2 F GGTGCCACCTGTGGTCCACCT 261 55℃ bcl-2 R CTTCACTTGTGGCCCAGATAGG 261 55℃ GAPDH F CCTCAACGACCACTTTGTCA 103 50-60℃ GAPDH R TTACTCCTTGGAGGCCATGT 103 50-60℃
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PCR反应条件如下 ：
94 ℃ 5min 1 Cycle
94 ℃ 30sec
52 ℃、53℃或55 ℃* 15sec 25 Cycle
72 ℃ 30sec
72 ℃ 7min 1 Cycle
4 ℃ 保存
注：p53退火温度为52摄氏度，bcl-2退火温度为55摄氏度, Bcl-xl退火温度为53摄氏度。
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实验采用GAPDH片段作为内参照。P53、bcl-2、Bcl-xl、GAPDH引物采用Olig