文档介绍：实验蛋白质含量测定2012
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优点：
不需添加任何试剂，因而对样品没有任何破坏；
测量极其简单迅速；
蛋白浓度和吸光度是线性关系，容易计算。
馏水 ul
1000
980
960
920
880
840
800
800
Folin-酚试剂甲 ml
4
4
4
4
4
4
4
4
混匀，于室温放置10分钟
Folin-酚试剂乙 ul
250
250
250
250
250
250
250
250
迅速混匀，30℃水浴保温30分钟
A640
Folin-酚试剂法（Lowry法）
生物化学与分子生物学基础实验
试剂、实验材料： （已放在每个试验台的架子上）
标准蛋白溶液：1mg/ml BSA
未知蛋白溶液
考马斯亮蓝染色液
Folin-酚试剂甲
Folin-酚试剂乙
生物化学与分子生物学基础实验
Lowry 法的改进法。
碱性条件下，蛋白分子中的肽键与Cu2+形成络合物，并将Cu2+还原成Cu+；
Cu+与BCA结合成紫色复合物，在562nm处吸收值与浓度呈正比
BCA法
生物化学与分子生物学基础实验
与Lowry方法相比，BCA法的操作更简单，试剂更加稳定，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度更高（），应用更加灵活。
可耐受高达5%的表面活性剂
测定不同蛋白样品时比bradford测定法结果均一
BCA法
生物化学与分子生物学基础实验
常用的测定蛋白质含量方法的比较
方 法
测定范围
（μg/ml）
不同种类
蛋白的差异
最大吸收
波长(nm)
特 点
凯氏定氮法
小
标准方法，准确，操作麻烦，费时，灵敏度低，适用于标准的测定
紫外吸收法
100—1000
大
280
205
灵敏度稍低，快速，不消耗样品，核酸类物质有影响
双缩脲法
1000—10000
小
540
重复性、线性关系好，灵敏度低，测定范围窄，样品需要量大
Folin-酚试剂法
20—500
大
500-750
灵敏，费时较长，干扰物质多
考马氏亮蓝G-250
50—500
大
595
灵敏度高，稳定，误差较大，颜色会转移
BCA
20—2000
大
562
灵敏度高，稳定，干扰因素少，费时较长
生物化学与分子生物学基础实验
1、由于各种方法测定原理不同，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度可能会有较大差异。
2、即使是用同一种比色法测定同一样品，选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。
3、所有的样品（包括标准样品），都必须在规定时间内测试。时间过长，得到的吸光值会有变化，导致测出的样品浓度与实际的浓度不符。
注 意
生物化学与分子生物学基础实验
722型光栅分光光度计
光源
单色器
样品池
光电源件
读数单元
测量完毕，请把光度计的盖打开 ！
讲解完毕后，每个组出一个同学去127听老师讲解仪器使用。
生物化学与分子生物学基础实验
TU1800 紫外可见分光光度计
波长范围：200－1100nm
测光系统：单光束
功能指标：光度测量
光谱扫描
定量测量
钨灯：340－1100nm
氘灯：200－340nm
生物化学与分子生物学基础实验
1 测紫外吸收要用石英比色皿 ！
2 定量实验取液要准确。
3 从低浓度到高浓度依次测量，比色皿不要润洗。 因此3ml溶液足够测定。
4 测量完毕，请把光度计的盖打开 ！
5 每次实验时提交上一次的实验报告。
注意事项
生物化学与分子生物学基础实验
实验报告
原始数据需老师签字，附在实验报告上。
真实记录实验数据，以标准蛋白含量为横坐标，相应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，并标出未知溶液的蛋白含量。可以进行各种软件绘图。
单位、标示要清楚
生物化学与分子生物学基础实验
微量移液枪使用注意事项
轻拿轻放，不能摔、砸。
严禁将量程调出标准使用范围。
使用过程中携带有Tip头的移液枪不可以倒过来(特别是里面还有液体的时候)，以防液体流入枪内，腐蚀部件。
不用移液枪时不要一直拿在手里，应挂于枪架上。
每日实验结束后，应将移液枪量程调至最大， 长期压紧弹簧会