文档介绍：左金丸方药3种方法提取液的初步药效学比较
【摘要】目的观察左金丸方药的3种提取液的抑菌、抗炎作用。方法分别制备左金丸的水提取液(m 直径圆形新华一号定性滤纸片,经压力蒸气灭菌处理后,置120℃烤干2 h,保存备用),微量移液器(5~50 μl,可调式),游标卡尺,营养琼脂培养基。
供试液的制备提取前将黄连、吴茱萸药材分别粉碎,过14目筛。
水提取液按照处方比例分别称取黄连粗粉12 g, 吴茱萸粗粉2 g,用水加热回流提取 3 次,时间分别为2,2,1 h,加水量依次为药材量的10,8,8倍,4层纱布加100目筛滤过,合并提取液,减压浓缩至60 ml样品液( g)。
60%乙醇提取液按照处方比例分别称取黄连粗粉12 g,吴茱萸粗粉2g,用60%乙醇浓度加热回流提取工艺提取,回流3次,时间分别为2,2,1 h,加醇量依次为药材量的10,8,8倍,4层纱布加100目筛滤过,合并提取液,回收乙醇,减压浓缩至60 ml样品液( g)。
半仿生提取液按照处方比例分别称取黄连粗粉12 g,吴茱萸粗粉2 g, 混匀,加热回流提取3次(加水量依次为药材量的10,8,8倍,用水煎煮3次,第 1 mol/L ;第2、 mol/L NaOH 调至pH ,;煎煮时间依次为170 min,85 min,40 min),提取液用 4 层纱布加100目筛分别滤过,离心(2 000 r/min,20 min),合并上清液,减压浓缩至60 ml样品液( g)。
操作程序
抑菌片的制备取无菌并干燥的滤纸片,制成直径为 5 mm,厚不超过 4 mm 圆片(块),每 4 片(块) 1 组, 3 种供试液各20 μl,然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,开盖置温箱(37℃) 中烤干后备用。
阴性对照样片的制备取无菌干燥滤纸片,制成与试验组大小相同的样(块)。每片滴加无菌蒸馏水 20 μl,干燥后备用。
试验菌的接种用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105~5×106cfu/ml 试验菌悬液,在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3 次。每涂抹1 次,平板应转动 60°,最后将棉拭子绕平板边缘涂抹1周。盖好平皿,置室温干燥 5 min。
抑菌剂样片贴放每次试验贴放1 个染菌平板,每个平板贴放4 片试验样片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25 mm 以上,与平板的周缘相距 15 mm 以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿,置37
℃温箱,培养16~18 h 观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片) 并记录。试验重复3 次。
测量抑菌环时,应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。
评价标准规定抑菌作用的判断:抑菌环直径大于 7 mm 者,判为有抑菌作用;抑菌环直径小于或等于7 mm 者,判为无抑菌作用。
抑菌结果见表1。表1 左金丸提取液抑菌结果
小结左金丸提取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌