文档介绍：抗体检测技术与类风湿因子
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抗体检测技术
免疫酶技术
免疫荧光技术
凝集反应
沉淀反应
补体结合试验
放射免疫测定
蛋白印迹
免疫共沉淀
亲和力测定
第2页，共32记后稳定
2. 常用酶：HRP、AP、ß-半乳糖苷酶等
3. 底物：
HRP可溶性底物及呈色：
邻苯二胺(OPD)：橙红(492nm)；四甲基联苯胺(TMB)：蓝色(450nm)
5-氨基水杨酸(5-ASA)：棕色(550nm) 鲁咪诺+H2O2：荧光
HRP不可溶性底物及呈色：
DAB：棕黄色 α-萘酚：红色 3-氧基-9-乙基卡唑：红色 4-氯-1-萘酚：灰蓝色
AP可溶性底物及呈色：
对硝基苯磷酸酯(P-NPP)：黄色(405nm) 4-甲基伞基磷酸酯(4-MuP)：荧光
AP不可溶性底物及呈色：
NBT和BCIP混合液：紫色 坚固红和萘酚ASMX混合液：红色
ß-半乳糖苷酶：
4-甲基伞基-ß-半乳糖苷：荧光
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4. 酶结合物的制备：
戊二醛交联法
过碘酸盐氧化法
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（三）设备：酶标比色仪简称酶标仪
指测读ELISA光度计；针对固相载体形式的不同，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计
性能指标：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性
，准确性为±1%，%
操作：室温宜在15-30℃，使用前先预热仪器15-30min，测读结果更稳定。测读A值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读
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用途
Dr Dennis E Bidwell and Alister Voller created the ELISA test to detect various kind of diseases, such as malaria, Chagas disease, and Johne's disease. ELISA tests also are used as in in vitro diagnostics in medical laboratories. The other uses of ELISA include:
detection of Mycobacterium antibodies in tuberculosis
detection of rotavirus in feces
detection of hepatitis B markers in serum
detection of enterotoxin of E. coli in feces
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WESTERN BLOT
步骤：
试剂准备：
1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。
2、匀浆缓冲液： Tris-HCl(pH )；10%SDS ；β-巯基乙醇 ；ddH2O 。
3、转膜缓冲液：甘氨酸 ；Tris ；SDS ；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、 PBS()：NaCl ；KCl ；Na2HPO4 ；KH2PO4 ；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰 ；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118 ml。包被液（5%脱脂奶粉，现配）： PBS中。
6、显色液：DAB ； PBS ；硫酸镍胺 ；H202 。
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样品制备
含量测定
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SDS－PAGE电泳
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转膜
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免疫反应
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化学发光
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类风湿因子
类风湿因