文档介绍：Revised on November 25, 2020
毕业论文设计
目录
1 普通光学显微镜的使用
2 微生物大小的测定
3 微生物直接计数法
4 细菌的简单染色和革兰氏染色法
5 常用玻璃器皿的清片，如标本玻片反放时高倍镜下看不到物像，并容易压坏玻片或物镜。
6. 观察时要双目睁开，切勿闭上一只眼睛。左眼观察视野，右眼用以绘图。低倍镜用粗调螺旋调节物距，高倍镜要用细调螺旋，粗、细调节螺旋都不能单方向过度地旋转。单向上升粗调螺旋会压碎镜片和损坏物镜。
7. 不要随便取出目镜，以防尘土落人物镜上。也不要任意拆卸任何零件，以防损坏。
8. 使用完毕后，转动粗调螺旋使镜台下降，取下玻片，转动物镜转换器，使物镜离开聚光孔。再上升镜台使物镜接近镜台（不要对着镜台孔）。然后以右手握镜臂，左手托镜座轻轻放人镜箱中。
9. 每次使用显微镜之前，先按显微镜登记卡片逐项检查显微镜各部分有无损坏。如发现损坏，应及时向教师报告。使用之后，认真填写显微镜使用登记卡片。
2 微生物大小的测定
一．材料及器材
菌种：酵母菌
仪器及其他用具：目镜测微尺，镜台测微尺，载玻片，盖玻片，显微镜、吸水纸
二．方法与步骤
(1) 装目镜测微尺。取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
(2) 校正目镜测微尺。
① 放镜台微尺。将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
② 校正。先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用推动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别读出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占的格数。
用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占的格数。
观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
③ 计算。由于已知镜台测微尺每格长10μm，根据下列公式即可分别计算出在不同放大倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度。
目镜测微尺每格长度（μm）=×10
(3) 菌体大小测定。目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母细胞切片。
酵母细胞切片的制作：①载玻片、盖玻片的清洗、干燥。
②滴酵母液。注意量要少，滴在载玻片中间部位。
③盖盖玻片。盖玻片一边与酵母液接触，缓慢放下，避免产生气泡。
④用吸水纸吸干余液。
测定：先用低倍镜找到标本，换高倍镜测定酵母菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌的宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（用油镜时）每格所代表的长度，即为该菌的实际大小。
(4) 测定完毕。取出目镜测微尺后，将目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。
(5) 结果
目镜测微尺每格长度（μm）=×10
3 微生物直接计数法
一．材料及器材
酵母菌液、显微镜、血球计数板、载玻片、盖玻片
二．方法步骤
1、镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，干燥后才能进行计数。
2、加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上血盖片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴,让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。样品要均匀充满计数室，不可有气泡。
3、显微镜计数
加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。计数左上、左下、右上、右下、中间共5个中方格，即计数80个小方格中的酵母细胞数。显微镜视野中的光线要暗一些，对于用反光镜采光的显微镜还要注意光线不要偏向一边, 否则，不容易看清计数室的方格线,或只见竖线或只见横线。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体为宜。计数时，对位于线上的酵母菌，可采用只计数两条边的办法，即遵循查上不查下，查左不查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小l/2时，即可计作两个细胞。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则
1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000AB（个）
同理，如果是16个中方格的计数板，
1mL菌液中的