文档介绍：BIOMIGA
Biomiga works for you!
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）
（详细内容请参考英文说明书）
实验前准备
注意事项
RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入BuB1的用量或减少菌体量。
加入350 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
小心吸取离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
注：此步对富含内源核酸酶的宿主菌（endA＋）来说是必须的，如HB101, JM101, TG1等；对endA-来说可省略，如Top 10和DH5a等，请参照英文说明书第3页的表2.
向离心柱中加入500 µL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。可选步骤：重复步骤“8”。
将离心柱放回高速离心机中，13000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
注：此步骤中开盖离心将会更有效的去除残留的乙醇，乙醇是否去除干净将会影响最后的洗脱效率。
mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL（体积>50 µL）的ddH2O（-）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。
BIOMIGA
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注：提取到的质粒DNA可直接用于基因克隆、测序、酶切、文库筛选、体外转录翻译、转染HEK293细胞。若用于转染内毒素敏感性细胞株，原代细胞及用于微注射，建议去除内毒素（PD1212）。
DNA浓度及纯度
DNA浓度(µg/mL) = OD260 x 50 x 稀释倍数，OD260/ -
常见问题及解答
1、没有提出质粒或者质粒收获量很低
A、菌种老化：
建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化。涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1：500的比例进行菌种培养。二次培养细胞最好不要超过16小时。
B、低拷贝质粒：
建议：如果是由于低拷贝质粒引起的质粒收获量低，可以采用两倍的菌体量，并相应增加各种Buffer的用量，如果必要，更换具有相同功能的高拷贝质粒载体。
C、质粒丢失
建议：某些质粒在多次继代培养的过程中会出现丢失的现象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
D、裂解不充分
建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。请根据选取的试剂盒，处理相应量的细菌量。
E、Buffer中有沉淀未溶解
建议：Buffer B1和Buffer N1在温度较低时会出现沉淀，使用前请检