文档介绍：斑马鱼胚胎整体原位免疫荧光实验
第一天：
固定：收集斑马鱼胚胎于解剖显微镜下去除绒毛膜，加入4%多聚甲醛（溶于无 RNA酶的PBS）, 4°C固定8h。然后加入更换新鲜纯甲醇后于一20°C长期保存。
第二天：
洗涤和通透：在室温下，斑马鱼胚胎整体原位免疫荧光实验
第一天：
固定：收集斑马鱼胚胎于解剖显微镜下去除绒毛膜，加入4%多聚甲醛（溶于无 RNA酶的PBS）, 4°C固定8h。然后加入更换新鲜纯甲醇后于一20°C长期保存。
第二天：
洗涤和通透：在室温下，以25%PBST/75%甲醇、50%PBST/50%甲醇、75 % PBST/25%甲醇逐级复水，每步3 min, 100%PBST洗涤三次，各5 min。
用H2O洗涤1次，5 min
用***通透胚胎1次，7 min （-200C）
用H2O洗涤1次，5 min
用PBST洗涤1次，5 min
封闭：加入适量封闭液， h以上。
抗体孵育：更换新鲜封闭液，加入一抗（10〃g/ml，置于4C过夜。
第三天：
清洗：用洗涤液（1% BSA，1% DMSO的PBST溶液）清洗抗体8次，前7次 每次15min，第8次2h。
封闭：加入适量封闭液， h。
抗体孵育：更换新鲜封闭液，加入二抗，置于4C过夜。
第四天： 清洗：用洗涤液（1% BSA，1% DMSO的PBST溶液）清洗抗体8次，每次15min。
用PBST溶液洗涤胚胎2次，每次5min。