文档介绍：分子生物实验
一、名词解释（5x3'
Plasmid:质粒，是细菌染色体外的遗传物质，是染色体外小型双链环状的DNA，大小在l-200kb之间，质粒能自主复制，在细菌中不断复制自身。
Polymerasechainreaction:聚于外槽内，外槽也加电泳buffer。
上样：将各时间段的样分别取10|il加到样孔中，上样时记清顺序。
接通电源：80V恒温电泳至溴酚蓝注入分离胶，-1cm停止电泳。
撬开玻璃板，剥胶。注意分离胶要完整，做好标记后放至有考马斯亮蓝的培养皿中染2h后，用脱色液脱色（期间更换脱色液2-3次），直到蛋白质条带清晰，观察结果并拍照保存。
酵母表达载体与一般的细菌表达载体有哪些相同点和不同点？
相同点：要经过目的基因的获取，目的DN***段的扩增，载体与目的DN***段的连接，连接产物的转化和转化后重组子的鉴定。
不同点：酵母表达载体多为穿梭质粒载体，并且目的基因DN***段与T4载体连接、转化、鉴定后再用酶切目的DNA（5wbp）连接，再用PGBK7EKQ载体连接、转化、筛选、鉴定；用于筛选标记基因主要有营养缺陷型互补基因和显性基因两大类。
一般细菌表达载体的载体不是穿梭质粒载体，并且目的基因DN***段只需一种载体即可鉴定筛选，一般用蓝白斑筛选原理，比如在羧苄青霉-gal、IPTG的选择平板上，涂布进行筛选。
简述质粒DNA提取实验中，溶液I、II、IU的作用？
溶液I：其中的葡萄糖能够悬浮大肠杆菌、Tris-HCl缓冲液能控制溶液的pH值、EDTA螯合大肠杆菌中的金属离子。
溶液I：其中的NaOH碱裂解大肠杆菌的细胞膜，2%SDS是沉淀剂。
溶液III：其中的乙酸钾作用是使沉淀能力更强，冰醋酸是中和多余的氢氧化钠。
简述琼脂糖凝胶电泳检测DNA的步骤？
将有机玻璃内槽洗净晾干，放置于水平制胶器内，并架好样品梳子。
制胶：配置适宜浓度的琼脂糖凝胶，，放入洗好的锥形瓶内，（用量筒量取后，用纸盖盖着锥形瓶的口，）放入微波炉内加热融化，然后冷却片刻，加入1卩1核酸染液，混匀，然后倒入架好的有机玻璃内槽中，待其凝固。
拔梳子：室温下20-30min后，有机玻璃的内槽的凝胶形成一层均匀的胶面，小心拔出梳子。
4•将有机玻璃内槽连同凝胶拔出，放入电泳槽内，向电泳槽内加入电泳缓冲液（），其量以没过胶面1mm为宜。
加样：分别取20卩lDNA和20卩lloadingbuffer混匀，用移液枪将混匀的样品缓缓加入点样孔中（每样孔7口）。
接通电源：红色为正极，黑色为负极，DNA样品由负极向正极移动，一般选择80V电压，电泳时间为30min。
当溴酚蓝移动到距凝胶前沿1-2cm处，停止电泳。
8•电泳完毕，关上电源，取出凝胶，在染色体投射仪下，观察结果。
简述聚合酶链反应的原理和过程？
原理：类似于DNA的天然复制过程。反应体系为：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。包括高温变性（94°C）、低温复性（50-60°C）、中温延伸（72°C）三个过程。
1•根据模板，设计引物。
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