1 / 47
文档名称:

实验三蛋白质的盐析分离和凝胶层析.ppt

格式:ppt   大小:2,299KB   页数:47页
下载后只包含 1 个 PPT 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

实验三蛋白质的盐析分离和凝胶层析.ppt

上传人:zhangxuezhun 2022/8/16 文件大小:2.25 MB

下载得到文件列表

实验三蛋白质的盐析分离和凝胶层析.ppt

相关文档

文档介绍

文档介绍:生物化学实验 Biochemical Experiment
实验成绩评分方法
实验预****情况(10%)
实验操作情况(30%)
实验报告情况(30%)
实验考试成绩(20%)
实验素质(遵守实验室规则和道德行为)(10%)
色谱工作站
WINDOWS 98 作为色谱分析的数据采集和处理,后端采用数据库工具 MS-SQL 在网络上进行分析结果的存档、检索及打印等。
高效液相色谱仪
气相色谱仪
蛋白质的盐析分离原理
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体,在高浓度的中性盐影响下脱去水化层,同时,蛋白质分子所带的电荷被中和,结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。经透析或用水稀释时又可溶解,故蛋白质的盐析作用是可逆过程。分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。改变盐浓度,使不同分子量的蛋白质分别析出。
凝胶层析原理
凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等 。
对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外(所用洗脱液的体积为外水体积);而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,尔后又被流出的洗脱液带走(所用洗脱液的体积为内水体积)。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。
凝胶层析载体
用作凝胶的载体物质有交联葡聚糖、聚丙烯酰***和琼脂糖等。使用最多的是交联葡聚糖。
交联葡聚糖的商品名为Sephadex,是由链状葡聚糖通过交联剂1—***代—2,3—环氧丙烷交联而成。交联剂添加越多,孔径越小,吸水量也越小;反之越大。以G-x表示型号,后面的数字可以看出交联度,数字越小,胶联度越大。
SephadexG-25g,干粒子直径100-300µm,筛孔40-60。大部分蛋白质分子从外水体积流出,盐等小分子从内水体积流出。
实验步骤(一)卵球蛋白的沉淀
实验步骤(二)卵球蛋白的脱盐
注意事项
实验完毕后,将凝胶全部回收处理,以备下次实验使用,严禁将凝胶丢弃或倒入水池中。
样品溶液的浓度大一些好,但粘度不宜大,加样体积通常为凝胶柱床体积的1%-10%。
洗脱用的液体与凝胶溶涨和凝胶平衡时所用的一样。
洗脱速度要恒定。
凝胶暂时不用时,要加防腐剂(%叠氮化钠溶液)
再次使用凝胶时可再生后使用
蛋白质洗脱曲线记录方式
盐离子检测方法
用醋酸钡检测溶液中的硫酸根离子。
灵敏度高,与溶液中的硫酸根离子可以形成白色的沉淀。同时不能同蛋白质形成沉淀。
实验中要设对照,即加入双蒸水和醋酸钡检测溶液。
为什么不用***化钡?因为***化钡易同蛋白质形成沉淀。
记录结果:
1
2
3
4
5
6
7
8
9


+
+++
++
+



思 考
蛋白质的沉淀作用还有哪些方法?哪些是变性了?哪些没有变性?在分离蛋白质时常使用哪些方法?
目前常用的脱盐还有哪几种方法?
柱层析有哪些种类?其分离物质的基本原理?
投 资 学(Investments) 实验教学 实验三 证券交易
25
目的要求
(1)熟悉开户、委托、交割与清算程序;
(2)掌握连续竞价与集合竞价的操作;
(3)证券公司与交易所的运作;
26
指令驱动市场的交易过程
开户
委托买卖
竞价与成交
不成交
成交
清算
交割
过户
27
一、开户
开户:投资者在证券经纪商处开立证券交易账户。经纪商只是代办手续。
交易所并不直接面对投资者办理证券交易
账户类型
证券账户:投资者的证券存折,由证券登记机构为投资者设立
投资者开立账户,即意味着委托该机构办理登记、清算和交割
资金账户:现金帐户、保证金(垫金)帐户等,由经纪商代为转存银行
28
二、委 托
含义:向经纪商下达买卖指令(Order)。经纪商立即传达给派驻在交易所内的代表(代理)。
委托内容:证券名称、买卖数量、指令类型(出价方式与价格幅度)、委托有效期等
指令类型:市价、限价、止损、止损限价
29
订单匹配的基本原则(优先性依次减弱)
价格优先:优先满足较高(低)价格的买进(卖出)订单
时间优先:同等价格下,优先满足最早进入交易系统的订单
30
三、竞价与成交
交易制度是市场微观结构的核心

最近更新

2024年事业单位招聘考试浙江省衢州市职业能力.. 25页

2024年事业单位招聘考试江西省萍乡市职业能力.. 25页

2024年幼儿园教师年终工作总结13篇 48页

2024年事业单位招聘考试重庆市泸州市职业能力.. 21页

强夯振动的技术研究与数值分析的开题报告 2页

家具安装工年终总结(全文共7081字) 4页

家乡的春节作文400字合集[优秀范文五篇] 3页

2024年事业单位招聘考试山东省莱芜市职业能力.. 25页

2024年事业单位招聘考试福建省龙岩职业能力倾.. 22页

2024年事业单位招聘考试重庆市德阳市职业能力.. 23页

2024年事业单位招聘考试重庆市甘孜藏族自治州.. 22页

2024年事业单位招聘考试重庆市成都市职业能力.. 23页

2024年太阳能电池项目投资申请报告代可行性研.. 71页

2024年双头应急灯项目投资申请报告代可行性研.. 61页

2024年射频消融治疗仪项目资金申请报告代可行.. 64页

50个一学就会的物理小魔术 16页

7我收集的哮喘方子 11页

3小青蛙 8页

3D灯光+材质参数 21页

3.2的抽样分布定理证明 12页

小班4以内的点数教案反思7篇 18页

小学数学老师自学业务笔记范文合集(5篇) 82页

读书给我力量的演讲稿 72页

2024年气象测量仪器项目资金筹措计划书代可行.. 63页

四川省成都外国语学校2024-2024学年高二下学期.. 14页

锂电池厂用蒸汽的作用 8页

2023年云南省社区(村)基层治理专干招考聘用50.. 197页

江苏省常州市钟楼实验中学七年级英语下册 Uni.. 35页

接单员制度 5页

铝酸盐水泥水化机理 13页