文档介绍:生物化学实验Biochemical Experiment
实验成绩评分方法
实验预****情况(10%)
实验操作情况(30%)
实验报告情况(30%)
实验考试成绩(20%)
实验素质(遵守实验室规则和道德行为)(10%)
色谱工作站
WINDOWS 98 作为色谱分析的数据采集和处理,后端采用数据库工具 MS-SQL 在网络上进行分析结果的存档、检索及打印等。
高效液相色谱仪
气相色谱仪
蛋白质的盐析分离原理
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体,在高浓度的中性盐影响下脱去水化层,同时,蛋白质分子所带的电荷被中和,结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。经透析或用水稀释时又可溶解,故蛋白质的盐析作用是可逆过程。分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。改变盐浓度,使不同分子量的蛋白质分别析出。
凝胶层析原理
凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等 。
对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外(所用洗脱液的体积为外水体积);而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,尔后又被流出的洗脱液带走(所用洗脱液的体积为内水体积)。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。
凝胶层析载体
用作凝胶的载体物质有交联葡聚糖、聚丙烯酰***和琼脂糖等。使用最多的是交联葡聚糖。
交联葡聚糖的商品名为Sephadex,是由链状葡聚糖通过交联剂1—***代—2,3—环氧丙烷交联而成。交联剂添加越多,孔径越小,吸水量也越小;反之越大。以G-x表示型号,后面的数字可以看出交联度,数字越小,胶联度越大。
SephadexG-25g,干粒子直径100-300µm,筛孔40-60。大部分蛋白质分子从外水体积流出,盐等小分子从内水体积流出。
实验步骤(一)卵球蛋白的沉淀
实验步骤(二)卵球蛋白的脱盐
注意事项
实验完毕后,将凝胶全部回收处理,以备下次实验使用,严禁将凝胶丢弃或倒入水池中。
样品溶液的浓度大一些好,但粘度不宜大,加样体积通常为凝胶柱床体积的1%-10%。
洗脱用的液体与凝胶溶涨和凝胶平衡时所用的一样。
洗脱速度要恒定。
凝胶暂时不用时,要加防腐剂(%叠氮化钠溶液)
再次使用凝胶时可再生后使用
蛋白质洗脱曲线记录方式
盐离子检测方法
用醋酸钡检测溶液中的硫酸根离子。
灵敏度高,与溶液中的硫酸根离子可以形成白色的沉淀。同时不能同蛋白质形成沉淀。
实验中要设对照,即加入双蒸水和醋酸钡检测溶液。
为什么不用***化钡?因为***化钡易同蛋白质形成沉淀。
记录结果:
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++
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思 考
蛋白质的沉淀作用还有哪些方法?哪些是变性了?哪些没有变性?在分离蛋白质时常使用哪些方法?
目前常用的脱盐还有哪几种方法?
柱层析有哪些种类?其分离物质的基本原理?
投 资 学(Investments)实验教学实验三 证券交易
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目的要求
(1)熟悉开户、委托、交割与清算程序;
(2)掌握连续竞价与集合竞价的操作;
(3)证券公司与交易所的运作;
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指令驱动市场的交易过程
开户
委托买卖
竞价与成交
不成交
成交
清算
交割
过户
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一、开户
开户:投资者在证券经纪商处开立证券交易账户。经纪商只是代办手续。
交易所并不直接面对投资者办理证券交易
账户类型
证券账户:投资者的证券存折,由证券登记机构为投资者设立
投资者开立账户,即意味着委托该机构办理登记、清算和交割
资金账户:现金帐户、保证金(垫金)帐户等,由经纪商代为转存银行
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二、委 托
含义:向经纪商下达买卖指令(Order)。经纪商立即传达给派驻在交易所内的代表(代理)。
委托内容:证券名称、买卖数量、指令类型(出价方式与价格幅度)、委托有效期等
指令类型:市价、限价、止损、止损限价
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订单匹配的基本原则(优先性依次减弱)
价格优先:优先满足较高(低)价格的买进(卖出)订单
时间优先:同等价格下,优先满足最早进入交易系统的订单
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三、竞价与成交
交易制度是市场微观结构的核心