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无菌工艺模拟试验指南无菌制剂
无菌工艺模拟试验指南（无菌制剂）
（征求意见稿）
施模拟试验的目的之一。进行模拟试验方案设计时，应结合工艺过程中的“开放”环节，重点考察有人员参与的关键操作，评价人员无菌操作素养和防护措施的可靠性。
模拟介质的选择与评价
模拟介质的选择
应结合被模拟产品的特点以及模拟介质的可过滤性、澄清度、灭菌方式等选择合适的模拟介质。不应选择明显具有抑菌性的模拟介质，以确保模拟试验结果的可信度。通常可采用的模拟介质包括促进微生物生长的培养基和安慰剂。
培养基的选择
胰酪大豆胨液体培养基（TSB）是一种广谱性培养基，特别对无菌工艺环境中源自人体的细菌、芽孢和真菌有良好的促生长效果，是无菌工艺模拟试验常用的培养基。
如果产品需充入惰性气体、储存在无氧条件，无菌操作在严格的厌氧环境中进行时（即氧气浓度低于%），应考虑采用厌氧培养基，如硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）。在厌氧的无菌工艺环境监控中反复发现厌氧微生
物或在产品无菌检查中发现厌氧微生物时，需评估增加厌氧培养基。
用于模拟抑菌性产品的培养基，需评估抑菌性产品残存对其促生长能力及模拟试验结果的影响。
对于包含动物来源成分的培养基，应考虑培养基引入外源性病毒污染的风险。如BSE（可传染性海绵脑病）/TSE（疯牛病）的风险。
培养基的配制
模拟试验的培养基应在控制区域进行准备。需注意培养基粉尘在环境中的扩散，以及设备表面的残留引发的微生物滋生。通常按照最终培养浓度3%的要求配制培养基。配制后的培养基应尽快灭菌或除菌过滤。
培养基在模拟试验前应恢复至室温，即用型无菌液体培养基储存条件和使用条件可遵循生产商要求。
培养基的除菌与灭菌
除菌过滤
在培养基选择阶段应考虑其过滤性。由于培养基的特性与药液有差异，培养基除菌过滤的滤器型号可与产品使用的过滤器不同
。如因颗粒或生物负载较大等原因引起除菌过滤器的堵塞时，可增加预过滤步骤。
需考虑降低非无菌培养基中细菌和霉菌生长的风险，以避免微生物生长导致培养基过滤性能降低。针对以上情况应进行风险评估并采取合理应对措施。
湿热灭菌
采用在线灭菌或灭菌釜湿热灭菌方式时，应考虑避免受热不均匀或灭菌不充分现象。应对该灭菌方式进行风险评估和验证。
灭菌过程应遵循生产商推荐的灭菌时间和温度的建议，并对灭菌过程予以确认。确保灭菌后培养基的促生长能力，避免过度灭菌使培养基碳化造成其促生长性能的降低。为避免过度加热可采用湿热灭菌与除菌过滤联合使用的方式，但均应进行促生长能力试验。
辐照灭菌
使用辐照灭菌的培养基粉末，应在无菌环境下进行无菌配制等操作。辐照灭菌过程应经验证，并在产品质量报告中体现验证中所用的菌种和剂量等信息。
培养基促生长能力试验
应在无菌工艺模拟试验前及14天培养后按照现行中国药典方法对培养基进行促生长能力试验。
促生长能力试验使用的菌种包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢杆菌（CMCC63501）、金黄色葡萄球菌（CMCC26003）、铜绿假单胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）等。除标准菌株之外，还应考虑加入环境和无菌检查中发现的典型微生物。促生长试验接种量应不大于100CFU，按照中国药典要求培养，以证明培养基能够支持微生物的生长。
其它模拟介质的选择及评价
其它模拟介质的选择
无菌粉末产品及特殊剂型产品，如悬浊液、软膏/乳膏/乳液/凝胶等，在无菌工艺模拟试验中会使用其它模拟介质，如安慰剂、赋形剂等。应根据剂型特点、生产工艺及设备选择适当的模拟介质。
模拟介质的流动性应类似于被模拟产品，易于进行灌装/分装等工艺操作。模拟介质还应具有易于灭菌，无抑菌性，易溶解等特性。常用模拟介质有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、***化钠、凡士林等。模拟介质的灭菌过程应经验证并提供相关报告，其内容包括
灭菌方式对模拟介质特性有无不良影响，灭菌后的无菌性。模拟介质的包装形式应与被模拟物的包装形式一致。
其它模拟介质的评价
在使用模拟介质前应对其适用性进行确认，包括无菌试验、抑菌试验、溶解度试验等。抑菌试验通常使用枯草芽孢杆菌（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，还应考虑加入环境和无菌检查中发现的典型微生物。无菌模拟介质由无菌注射用水分散，然后加入到无菌培养基中，达到模拟工艺选用的浓度范围。然后在每份培养基中接种10-100CFU。阳性对照接种到不含无菌模拟介质的试管中，在20-25℃培养7天所有