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C18色谱柱使用指南.docx

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C18色谱柱使用指南.docx

文档介绍

文档介绍:C18色谱柱使用指南
1、 新柱子在使用前需用纯有机试剂(如甲醇、乙***)低流速冲洗,冲洗体积以20倍柱体积 为宜,以便固定相能充分润湿、碳链能舒展彻底,使色谱柱的性能达到巅峰状态;
2、 使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱,尤其是流动相C18色谱柱使用指南
1、 新柱子在使用前需用纯有机试剂(如甲醇、乙***)低流速冲洗,冲洗体积以20倍柱体积 为宜,以便固定相能充分润湿、碳链能舒展彻底,使色谱柱的性能达到巅峰状态;
2、 使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱,尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中 的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;
3、 长期保存前要将色谱柱彻底冲洗,建议冲洗3-4小时以上,最后保存在纯有机试剂或高 比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;
4、 日常保存溶剂(即第二天需继续使用时)尽量与3中相同;
5、 由于C18柱(极性改性处理的除外)的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用 高水相条件,若水相比例过高,易引起固定相疏水塌陷,导致柱效迅速下降,甚至造成不可 逆的负面影响,建议使用过程中水相比例不超过90%;
6、 色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部 分柱效;
7、 色谱柱压力骤升,通常由盐析出或筛板堵塞引起。若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲 洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色 谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果,则需寻找其他原因。
色谱柱再生处理步骤:
按照下列次序冲洗色谱柱,冲洗体积均为20倍柱体积:10%甲醇水T甲醇T异丙醇(或*** 仿)-甲醇-10%甲醇水 (步骤3选用异丙醇时,由于异丙醇粘度较大,需适当降低流速, ml/min)
柱体积计算表:
色谱柱尺寸
色谱柱体积
冲洗体积(20倍)
mm
mL
50 mL
mm
mL
66 mL
mm
mL
84 mL