文档介绍：实验三常用培养基的制备、灭菌与消毒
实验目的:
培养基是人工配制的,适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质
原则:目的明确;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济节约
方法:查阅文献;精心设计;试验比较
步骤:称量、熔化、调PH、过滤、分装、
加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查
培养基种类:
碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水
一、按成份的不同划分
天然培养基、合成培养基、半合成培养基
二、按培养基的物理状态划分
固体培养基、液体培养基、半固体培养基
三、按培养基用途划分
基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下:
牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,琼脂15~20g,水1000mL,~(后调)
高氏1号培养基
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下:
可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl ,K2HPO4·3H2O ,MgSO4·7H2O ,FeSO4·7H2O ,琼脂15~20g,水1000mL,~。
查氏合成培养基
查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基,其配方如下:
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl ,
,FeSO4 ,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在50-60℃保温糖化3-4小时,用碘液试验检查至糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后,过滤,。
消毒与灭菌
消毒:消灭病原菌和有害微生物的营养体
灭菌:杀灭一切微生物的营养体,芽胞和孢子。
方法:
物理的方法:加热、过滤、辐射
化学的方法:用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子,磺胺类药物及抗生素等。
加热法:
干热法:火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等,试管口和瓶口,涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气(160-170C)加热灭菌1-2h,适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当环境和细胞含水量越大,凝固越快。
3、注意事项:
1)培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;
2)温度控制在<180°;
3)物品不能太挤;
4)温度降至70°时才开箱门。
湿热法:
原理:因为湿热中菌体吸水,蛋白质容易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。
高压蒸汽灭菌法:
1、设备:高压灭菌锅
2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。
3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。
4、注意事项:
1)冷空气彻底排除;2)加水;3)压力降为“0”时方可打开。