文档介绍：蛋白酶活力测定
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一、概述
1．什么是酶？
2．影响酶催化反应的因素
3．什么是酶的活力?
4．测定意义
5. 测定方法
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测定意义
生皮蛋白质
胶原蛋白（80%-85%）
非胶原蛋白
弹性蛋白
网硬蛋白
间质蛋白
酶的活力会下降
酶的催化能力强
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测定方法
乙醇滴定法、甲醛滴定法等
Folin-酚法，紫外分光光度法，残氮量测定法等等。
Gross法、明胶粘度下降法、凝乳作用法
酸性蛋白酶活性，还可以根据胰蛋白酶原激活作用的大小来表示。
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福林试剂，在碱性情况下极不稳定。可被酚类化合物还原，而呈蓝色反应。由于蛋白质或水解产物中含有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸等)也呈这个反应，因此可以利用这个原理来测定蛋白酶活性的强弱。
二、测定原理
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1．酶催化反应
酪蛋白
酶催化
条件
酪氨酸
白色至黄色粉沫，无臭无味，溶于稀碱、浓酸，在弱酸中沉淀，几乎不溶于水，有吸湿性，干燥时稳定，潮湿时迅速变质。
条件：底物浓度温度 pH 时间
选择： C0 T最适 pH最适 t0
措施： C≥ C0 恒温水浴缓冲溶液 t= t0
例子： 537 %酪蛋白 40℃ 10min
例子： 1398 %酪蛋白 40℃ 10min
例子： 2709 %酪蛋白 40℃ 10 10min
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福林试剂 + 酪氨酸 OH-

HO — —CH2—CH—COOH

还原性 NH2
钼蓝+钨蓝
蓝色物质
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显色剂
Na2WO4
Na2MoO4
H2O
H3PO4 福林试剂→
HCL
Li2SO4
Br2
显色剂
亮金黄色
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3．朗伯-比尔定律及其应用
E —— 吸光度
A —— 消光值
OD —— 光密度

E = K·Ｃ·L
= lg（I0/I）
= K′· C
透光率 T = I I0
入射光强度I0
透过光强度I
有色真溶液
C
L
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朗伯-比尔定律的应用
[X] → [RX] → OD
被测组分的浓度与光密度OD成直线关系
[X] OD
OD=K·C[RX]
OD= K′·C[X]
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①选择λmax
注意:
λmax =680nm
②OD值的范围
OD=～
OD=
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4．制作标准曲线
酪氨酸浓度C OD
C1 OD1
C2 OD2
C3 OD3
··· ···
Cn ODn
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福林—酚法测定蛋白酶活力方法要点
配制系列浓度的酪氨酸标准溶液，在一定条件下