文档介绍：第二章 紫外-可见分光光度分析法
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颜色的产生白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光
吸光光度法的基本原理
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能复合成白光的两种颜色的光叫互补色光。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。
样品室
样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。
利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。
5. 结果显示记录系统
检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理
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二、分光光度计的类型
简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。
自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。
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将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△= 1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。
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A 原理
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双光束光度计动画示意
动 画
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双波长光度计光路示意图
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四、光的吸收定律
—比耳定律
布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。
1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A∝c
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朗伯定律：A=K2*L
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比尔定律：A=K3*C
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透过光的强度It；与入射光的强度Io比之比称为透光度或透光率，用T表示。 T＝ It / Io
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朗伯-比尔定律的表达式
A＝lg（I0/It)= kL c
式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；
L：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；
c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１；
k：摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１；
或: A＝lg（I0/It)= a L c
c：溶液的浓度，单位g·L－１
a：吸光系数，单位L·g－１·cm－１
a与k的关系为：
a =k/M （M为摩尔质量）
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透光度
透过度T : 描述入射光透过溶液的程度:
T = I t / I0
吸光度A与透光度T的关系:
A ＝ －lg T
朗伯—比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量；
摩尔吸光系数k在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度；
吸光系数a(L·g-1·cm-1）相当于浓度为1 g/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。
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（1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数，可作为定性鉴定的参数；
（2）不随浓度c和光程长度L的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，k仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；
（3）同一吸收物质在不同波长下的k值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以kmax表示。kmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。
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摩尔吸光系数的讨论
（4）kmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。k>105：超高灵敏；
k=(6～10）×104 ：高灵敏；
k<2×104 ：不灵敏。
（5）k在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。
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—比耳定律的原因
标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。
引起这种偏离的因素（两大类）：
（1）物理性因素，即仪器的非理想引起的；
（2）化学性因素。
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（1）物理性因素
难以获得真正的纯单色光