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土壤生态修复相关酶指标测定.docx

上传人:guoxiachuanyue002 2022/8/25 文件大小:23 KB

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文档介绍

文档介绍:土壤生物化学指标测定
土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定(比色法)
(一)分析意义脱氢酶能酶促脱氢反应,它起着氢的中间传递体的作用。在土壤中,碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃,他们可以作为氢的工体。脱氢酶能自基质中析1mg氮的标准液,绘制标准曲线时,可将此液稀释10倍供用。
(四)实验步骤
1、标准曲线的绘制:吸取稀释3倍的标准液0、、、、、,移于10ml离心管中,。先加2ml苯酚钠溶液,***酸钠溶液,每加入一种试剂后均将混合物仔细混合。20分钟后显色,1h内在分光光度计上于578nm处比色,制作标准曲线。
2、操作过程:取相当于1g新鲜土壤置于10ml离心管中,。15分钟后加2ml10%。,,,***酸钠溶液,每加入一种试剂后均将混合物仔细混合。
20分钟后显色,1h内在分光光度计上于578nm比色,实验需设无基质对照和无土壤对照,无基质对照用水替代。对照组不加尿素!!!
3、结果计算:脲酶活性以24h后1g土壤中氨基氮的含量表示。
NH3N(ug)=a*10/5g—土壤含水量
a——测得的氨基氮的含量
土壤蔗糖酶活性测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)
一、原理
蔗糖酶与土壤许多因子有相关性,如与土壤有机质、氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度有关,一般情况下,土壤肥力越高,蔗糖酶活性越高。蔗糖酶酶解所生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关,因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1)酶促反应试剂:基质8%蔗糖,pH5・5磷酸缓冲液:1/15M磷酸氢二钠(・2H2O溶于1L蒸馏水中)(),甲苯
2)葡萄糖标准液(1mg/mL)
预先将分析纯葡萄糖置80°C烘箱内约12小时。准确称取50mg葡萄糖于烧杯中,用蒸馏水溶解后,移至50mL容量瓶中,定容,摇匀(冰箱中4C保存期约一星期)。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象,则应弃之,重新配制。
3)3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂)
,溶于20ml2mol/LNaOH和50ml水中,再加30g酒石酸钾钠,用水稀释定容至100ml(保存期不过7天)。
三、操作步骤
(1)标准曲线绘制
分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、、、、、1mL于试管中,再补加蒸馏水至1mL,加DNS试剂1mL混匀,于沸水浴中准确反应5min(从试管放入重新沸腾时算起)取出立即泠水浴中冷却至室温,以空白管调零在波长508nm处比色,以OD值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
(2)土壤蔗糖酶测定
称取1g土壤,置于50mL三角瓶中,注入3ml8%蔗糖溶液,。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37C下培养24h。到时

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