文档介绍：小鼠脾脏单个核细胞分别及细胞计数
实验时间：实验地点：实验人：
实验原理
小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。
外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定
小鼠脾脏单个核细胞分别及细胞计数
实验时间：实验地点：实验人：
实验原理
小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。
外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定地域，因此富含各
类免疫细胞。
免疫细胞的分别：采纳红细胞裂解法，是依据细胞对浸透压变化的敏感度。
红细胞因为细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因
此绝大部分就会涨破，遇到破坏。是一种比较平和的去除红细胞最简易易行的方
法。
实验资料：
健康小鼠
手术器材（剪刀、镊子）、解剖板
70%乙醇
PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK）
%台盼蓝
细胞计数板、计数器
离心计
显微镜
实验方法：
取小鼠脾脏
将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。
用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除四周组织。
制备单个核细胞悬液
将拿出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，而后再置于尼龙指套中，用
针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。
汲取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10min，弃去上清液，加入ASK至2-3ml，轻轻吹打混匀并搁置2min，以破坏红细胞。而后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10min。
弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞
悬液。
计算细胞浓度
稀释十倍，随机采纳一个大方格计数
细胞计数为324个，计算细胞浓度为
4
×
7
324×10×
10=10/ml
计算细胞活力
在总计为324个细胞被骗数，死亡细胞有16个，计算细胞活力为：
324-16/324×100%=%
在理论范围以内
实验结果
研磨脾脏获取细胞悬液
本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少许PBS液中缓慢研磨，获取细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不可以滤去全部结缔组织，操作中会