文档介绍：冰冻切片组织的制备:
固定
将组织置于4%多聚甲醛固定液中，4°C摇床过夜。
漂洗
将固定后的标本用1X PBS漂洗三次，每次15分钟。
脱水
将组织置于30%蔗糖溶液中，4C摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，判断的标准 是，当冰冻切片组织的制备:
固定
将组织置于4%多聚甲醛固定液中，4°C摇床过夜。
漂洗
将固定后的标本用1X PBS漂洗三次，每次15分钟。
脱水
将组织置于30%蔗糖溶液中，4C摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，判断的标准 是，当管竖直时，组织是否沉到蔗糖溶液的底部，若组织已完全沉降到蔗糖溶液的 底部，平放或震荡后仍能沉降，则可判断组织已脱水完全。
包埋 将组织倒入培养皿中，用眼科刀将脑和脊髓根据切片切面的需要在不同的部位切开， 并做好头尾端的标记。之后将组织置于包埋盒中，用滤纸吸干组织周围多余的蔗糖 溶液，滴加OCT (optimal cutting temperature compound)到包埋盒中，用移液枪头 ，切忌起气泡，静止10分钟，以防切片时脱片。重 新取一个包埋盒，将组织移入到包埋盒中，倒入OCT, 混匀，将组织按切片需要方向摆放于包埋盒的底部，迅速置于干冰与酒精的混合物 中。在包埋盒上做好标记，用保鲜膜和锡纸包好后放入-80C冰箱贮藏待切。
切片：
切片前先将切片机的箱体温度及刀头温度均设为-20C，把包埋盒从-80C冰箱取出 置于切片机中平衡半小时左右。，然后将样品 托固定在样品头上，调整合适的位置，以使样品与刀头处于平行位置。手动切片。 用细毛笔将切片均匀整齐地平铺在明胶包被的载玻片上，室温下晾片30min-1h后进 行免疫组化染色。
冰冻切片的快速染色法
冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。 以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根 据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内 含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻 切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内 各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，核染色质清晰，核仁明显，其他 物质都完好保存。
方法：
切片固定1分钟。
水洗(肉眼观察，洗净即可)。
染苏木素 5 分钟。
1%盐酸酒精分化。
于碱水中返蓝10秒。
伊红染色 10 秒。
7. 脱水，透明，中性树胶封固。
冰冻组织 1－2 分钟，切片 1 分钟，固定 1 分钟，染色共五分钟。总共在 10 分 钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。
冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻 切片法，半导体冰冻切片法和***乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使 用，因此在这里不作阐述。
冰冻切片免疫组织化学染色：
晾片将贴有组织的载玻片在空气中晾干，约30min-lh；
漂洗在1X PBS中漂洗3次，每次15 min。PHT室温下孵育30 min；
一抗孵育将切片放在湿盒内，用滤纸吸干玻片上多余的水分，滴加200卩1 一抗 工作液，盖好封口膜，4°C孵