文档介绍：消毒剂使用及效力验证
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能消除以细胞繁殖形态出现的微生
物污染的化学物质。
消毒剂的****惯定义：
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消毒剂的分类定义〔USP29 <1072>〕
抗菌剂〔Antiseptic)
化学物数量
反复使用，对设备外表的腐蚀程度
对操作者的平安性
和清洁剂/其它消毒剂的相容性
交替使用方案和对产品的影响
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消毒剂验证的目的：
通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。
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消毒剂验证的内容：
使用中稀释检测〔use-dilution tests)
对不同浓度下，对消毒剂的效力进行筛选
针对不同标准菌株和环境微生物，确认接触时间
外表挑战试验〔surface challenge tests)
使用标准菌株和典型环境别离微生物
选择适宜的浓度和接触时间，进行试验
获得挑战微生物数量下降的对数值
对使用新消毒剂前后环境微生物的检出频率和数量进行统计学评估〔无菌生产区域、GMP要求〕
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消毒剂验证步骤：
第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓
度和规定的作用时间进行确认。
第二步：应用不同材质的载体，进行模拟试验
第三步：完成验证报告，形成SOP。
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验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、沙门氏菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、环境别离菌。
菌种选择的原那么:代表性,普遍性,标准菌种。(环境中常见的污染菌)。
菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。
验证菌种：
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挑战微生物(USP 29)
AOAC挑战菌
典型环境分离菌
杀菌剂：大肠埃希菌ATCC 11229
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
铜绿假单胞菌ATCC 15442
杀菌剂：藤黄微球菌，表皮葡萄球菌，杰氏棒杆菌 ，泡囊假单胞菌
杀真菌剂：白色念珠菌ATCC 10231或2091
产黄青霉ATCC 11709
黑曲霉菌 ATCC 16404
杀真菌剂：产黄青霉，黑曲霉菌
杀孢子剂：枯草芽孢杆菌ATCC 19659
杀孢子剂：球形芽孢杆菌 ，苏云金芽孢杆菌
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准备性试验〔一〕
选择适合的中和剂
Letheen肉汤、D/E中和肉汤〔酚类，季铵盐类〕、TAT肉汤根底＋吐温20＋卵磷脂＋胰蛋白胨
消毒剂
中和剂
醇类
稀释或吐温80
戊二醛
甘氨酸和亚硫酸氢钠
次***酸钠
硫代硫酸钠
***己定
吐温80和卵磷脂
***化***及其它***制剂
硫乙醇酸
季铵盐类
吐温80和卵磷脂
酚类
稀释或吐温80和卵磷脂
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D/E中和肉汤〔每升〕
配方
胰蛋白胨 5 g
酵母膏 g
葡萄糖 10 g
硫乙醇酸钠 1 g
硫代硫酸钠 6 g
g
吐温 80 5 g
卵磷脂 7 g
溴甲酚紫 g
最终 pH 于 25℃
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准备性试验〔二〕
中和剂毒性
将10～100 CFU的微生物参加到中和剂中
薄膜过滤，冲洗，培养，计数
与菌液对照组比较，回收率应>70％
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准备性试验〔三〕
中和效力
将消毒剂和中和剂混合〔记录时间〕
参加10～100 CFU微生物
薄膜过滤，冲洗，培养，计数
与菌液对照组比较，回收率应>70％
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验证方法 - 薄膜过滤法
菌悬液和消毒剂直接混合，在不同的时间间隔条件下过滤，培养后评价。
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验证准备：
- 测试菌液准备
增菌过夜，并调整至106～108 CFU/ml
- 消毒剂稀释至规定浓度。
分装10ml于假设干无菌试管中；试管上标注消毒时间：如“1分钟组〞 ，“5分钟组〞 ，“10分钟组〞或其他要求的时间段。
- 配制中和剂〔分装100ml，300ml〕
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验证步骤〔1〕：
- 接种
接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管〔使接后浓度>104 CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。
- 中和、过滤 将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释〔如需要〕，过滤，然后用100ml中和剂清洗滤膜，滤过3次。
- 阳性对照
用无菌水代替消毒剂，步骤同上。
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验证步骤〔2〕：
培养和计数
取下滤膜放入规定的培养基平板，在规定的温度、时间培养后，记数。
和阳性对照相比，微生物数量下降应至少3个对数值〔细菌芽孢至少2个对数值〕。
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验证步骤〔3〕：外表挑战试验
根据设施的实际情况，选择不同材质的载体。
玻璃，不锈钢，塑料薄膜，乳胶，墙面涂料，地面材质
接种，并确认实际数量
接触杀菌、中和、过滤……
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正确使用消毒剂〔1〕
稀释消毒剂时应