文档介绍：第二章质粒和噬菌体
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内容:
质粒
质粒的基本特征
质粒的分类
噬菌体
噬菌体的基本特征
λ噬菌体
M13噬菌体
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:
存在于第二章质粒和噬菌体
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质粒
质粒的基本特征
质粒的分类
噬菌体
噬菌体的基本特征
λ噬菌体
M13噬菌体
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存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状的双链DNA分子。并不是细菌生长所必需的,但可以赋予细菌某些抵御外界环境因素不利影响的能力。
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自主复制性
可扩增性
严紧型(Stringent)
松弛型(Relaxed)
可转移性(穿梭载体Shuttlevector)
不相容性
Conjugation:接合
Compatibility:相容性
Incompatibility:不相容性
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纤毛
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表2-1代表性质粒的大小
质粒
大小/kb(千碱基对)
来源
pUC8
ColE1
RP4
54
Pseudomonas
F
95
TOL
117
Pseudomonasputida
pTiAch5
213
Agrobacteriumtumefaciens
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Fertility/F质粒:含有tra基因,促进接合转移。
Resistance/R质粒:含有***霉素、青霉素或水银抗性基因。如RP4,发现于假单胞杆菌。
Col质粒:。
降解质粒(Degradativeplasmids)
致瘤质粒(Virulenceplasmids)农杆菌Ti质粒
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酵母中发现了2μm的环状质粒。
其他真核生物中尚未发现质粒存在。
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Structure
Infectionprocess
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λ噬菌体的侵染循环
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Thelysogenicinfectioncycleofbacteriophageλ
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λDNA分子的基因组织
λDNA全长49kb。
λ遗传图谱的特点:相同功能基因在基因组中聚集在一起。这使他们一起启动或关闭,而不是单独起作用。
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Theλgeneticmapshowingthepositionsoftheimportantgenesandthefunctionsofthegeneclusters.
Controlintegration
Controlgeneexpression
Controlcoatprotein
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λDNA的线状和环状形式
在噬菌体头部,λ以双链线状存在,但在分子的两端各含12个核苷酸的突起GGGCGGCGACCT,CCCGCCGCTGGA,这两端的单链片段是互补的,可以通过碱基互补配对形成环状分子,完整的双链分子。λ的粘端称为cos(Cohensiveendsite)位点。
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cos位点的两个作用:
使进入细菌的DNA分子成为环状,这是插入细菌基因组的先决条件。
作为识别位点,由内切酶将原噬菌体从细菌基因组切下来。
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2噬菌体
M13的结构
M13是一个线状噬菌体,其分子仅有6407kb,分子是单链环状的。
M13含有的基因数目也少,M13的头部装配仅需要3种不同的蛋白,15个蛋白分子。
M13的侵染周期很短,不需要插入寄主的基因组。M13通过细菌的纤毛插入大肠杆菌,单链分子作为模板合成互补链,形成双链DNA分子。
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细菌细胞每分裂一次,大约可以释放1000个新的病毒颗粒。
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M13作为克隆载体的理由:
基因组小于10kb
复制的双链形式类似于质粒载体
利用M13作载体可以获得单链的DNA。
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3病毒作为其它生物的载体
大部分生物都能被病毒侵染。
动物细胞中病毒广泛作为基因克隆的载体:
猿猴病毒simianvirus40(SV40)
adenoviruses(腺病