文档介绍：荧光定量PCR的技术原理和应用 许冠东 ********** guan-@ 罗氏诊断客户服务部
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实时定量PCR原理
实时定量PCR染料与探针
实时定量PCR分析方法和应用
实时定量PCR原理 PCR原理简述
聚合酶链式反应(PCR):
能够按照模板DNA序列,在DNA聚合酶的催化下,用4种dNTP来合成与模板DNA完全相同的拷贝,从而在多种DNA分子的混合物中特异地扩增某一特定DN***段。
模板DNA
与模板DNA两端互补的一对引物
DNA聚合酶
dATP, dGTP, dCTP, dTTP
PCR反应原理 第一步:热变性
Target Sequence
目标序列
PCR反应原理 第二步:退火复性
目标序列
目标序列
引物 1
引物 2
5’
3’
5’
5’
3’
5’
3’
3’
PCR反应原理 第三步:链延伸
目标序列
目标序列
引物 1
引物 2
5’
3’
5’
5’
3’
5’
3’
3’
Taq DNA
Polymerase
PCR反应原理 第一个PCR循环结束
Target Sequence
Target Sequence
PCR扩增过程
通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性分析
在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行, PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线
实时荧光定量PCR技术 典型PCR扩增曲线
实时定量PCR原理 典型PCR扩增曲线分期