文档介绍：模块四、从土壤中分离、纯化放线菌
一、目的:

二、知识内容和要求:

。
三、技能内容和要求:
、涂布分离对微生物进行分离纯化。
从土壤中分离、纯化放线菌
1操作目的:

从土壤中分离、纯化放线菌

①通过提供只有利于某种微生物生长繁殖的最适培养基和培养条件
②在培养基中加入抑制剂,抑制除一种/类微生物外其他微生物的生长繁殖
③控制培养条件,利于某一种/类微生物而抑制其他微生物的生长繁殖
从土壤中分离、纯化放线菌

,尤其是在土壤中,在有机质丰富、水分充足,距地表10~20cm的土壤中,有细菌、真菌、放线菌、藻类、原生动物和病毒等。可以通过技术手段将某一种微生物单独分离出来。
,使其分散成单细胞,或者在培养基表面不断地划线,将菌一个个地拉开,培养后会形成一个个的菌落,即形成单菌落。
从土壤中分离、纯化放线菌
、试剂
恒温培养箱、培养皿、1ml/10ml移液管、玻璃刮铲、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、玻璃珠、脱脂棉等。
富含腐殖质的土壤
高氏1号琼脂培养基(P65 )、蒸馏水、1mol/L的NaOH与HCl溶液,10%酚溶液
从土壤中分离、纯化放线菌
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①采土:取距地表10~20cm的富含腐殖质的土壤20g左右,置于实验室内自然风干。
②常法配制高氏1号琼脂培养基,分装于三角瓶内。
③培养皿、移液管、玻璃刮铲用报纸包好。
④将玻璃珠和90ml蒸馏水置于三角瓶内塞上棉塞。
⑤一些空试管和6支各加水9ml的试管塞好棉塞。
⑥将上述②~ ⑤物品121℃灭菌20min ,备用。
从土壤中分离、纯化放线菌
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。
配方:可溶性淀粉 20g; NaCl ;
KH2PO4 ; FeSO4 ;
MgSO4 ; KNO3 1g
琼脂 20g ~
配制方法:先取小烧杯加冷水100ml,将淀粉调成糊状;大烧杯或不锈钢小锅加水500ml加热,依次称取、加入其他成分,琼脂剪碎,倒入水中,继续加热煮沸,边加热边搅拌至完全熔化,防止糊底;将淀粉糊倒入沸腾的水中,边加边搅拌,防止糊底。关火后加沸水补足至1000ml,~,分装。112℃灭菌20分钟。
从土壤中分离、纯化放线菌
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。取2套无菌平皿,在皿底贴上标签,注明土壤稀释液的稀释度( 10-4、10-5每个稀释度做一个培养皿)、组别、姓名、操作日期等。然后在每皿中倒入冷至50℃左右的培养基15~20ml,冷凝成平板。倒平板前在培养基内滴加10 %酚溶液数滴后混匀。酚属于抑制剂,可以使细菌、霉菌出现的数量大大减少,从而淘汰了其它杂菌。另取几支试管倒斜面。
倒平板
从土壤中分离、纯化放线菌
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。称取10g土壤样品,加入到装有90ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中,振荡约20 min,使土样与水充分混匀,将细胞分散,即得到10-1浓度的土壤悬液。用一支无菌吸管从中吸取1 ml土壤悬液加入装有9 ml无菌水的试管中,吹吸3次,让菌液混合均匀,即得到10-2浓度的土壤稀释液。依此法连续稀释制作浓度为10-3~10-5梯度的土壤稀释液。